[发明专利]一种天然重组纳米脂质载体制备技术与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物药物制剂领域，具体涉及肿瘤靶向及治疗的天然重组脂蛋白纳米粒及其制备工艺。

背景技术

脂蛋白是一类在颗粒大小、脂质成分、载脂蛋白种类均有差异的不均一颗粒，由包含载脂蛋白和游离胆固醇的磷脂单层以及非极性的脂质核心组成的生物大分子，在体内脂质转运过程中发挥关键作用。根据密度大小不同，通过密度超速离心法可将血浆脂蛋白(表1)分成四种：乳糜微粒(Chylomicrons，CM)、极低密度脂蛋白(Very low-density lipoprotein，VLDL)、低密度脂蛋白(Low-density lipoprotein，LDL)和高密度脂蛋白(High-density lipoprotein，HDL)。由于脂蛋白结构中具有一个脂核，并且LDL和HDL能被特定组织通过受体途径内吞吸收，如果将疏水性药物掺入到脂蛋白脂核部位，取代其核心脂质而不改变天然脂蛋白的完整性，则脂蛋白可作为载体将药物特异性传递到病灶部位。研究表明脂蛋白脂核中的脂质能被疏水性药物取代，不影响其细胞识别结合特性，且脂蛋白具有独特的亲水性-疏水性结构，内源性可完全降解，以及不被网状内皮系统识别、清除等特性，使脂蛋白纳米药物传输系统越来越受到重视。以脂蛋白为基础构建的仿生型纳米给药系统以其良好的体内相容性，天然的靶向性引起人们的广泛兴趣。Masuelier等在上世纪80年代报道了采用LDL与疏水化合物结合制备重组纳米粒；Lacko等通过体外重组将紫杉醇(PTX)载入重组高密度脂蛋白(rHDL)形成rHDL-PTX纳米粒，该纳米粒能够与癌细胞有效结合，使药物化疗过程中的毒副作用显著降低。专利US6514523B1公开了一种载药rHDL的制备方法，用于改善药效、降低毒性和减少网状内皮系统的吞噬，并将药物靶向传输至特定的组织或细胞；CN1307906A公开一种新型药物载体，利用rHDL载药提高药物向肝或肿瘤组织的靶向转运。虽然重组单一脂蛋白纳米粒的研究较广泛，作为抗肿瘤药物的载体已见文献和专利报道，但是如何制备体内稳定性较高的天然重组脂蛋白纳米粒尚未有报道，且载脂蛋白的来源受限，单一脂蛋白纳米粒靶向效果有待提高。本发明通过先拆分-后组装的方式体外还原天然脂蛋白，作为抗肿瘤药物载体，可有效的改善重组单一脂蛋白纳米粒存在的稳定性小、靶向性低等问题。

CN102977180A公开了一种从血浆组分IV中提取人血清白蛋白、免疫球蛋白、转铁蛋白、结合珠蛋白、α2-巨球蛋白、α1-抗胰蛋白酶、铜蓝蛋白、抗凝血酶III、载脂蛋白A-1(apoA-I)等、C1酯酶抑制剂等蛋白的方法。该发明中所述方法虽然蛋白收率高，但蛋白总类杂且多不利于血浆生产中废弃物的利用。

CN102127165B公开了一种从血浆组分IV中纯化得到高纯apoA-I的方法，通过如下步骤：血浆组分IV沉淀溶解，离心除去硅藻土及杂质，收集上清液；上清液加入氯化钠溶液离心获得apoA-I沉淀；复溶沉淀并过滤；滤液先后经阴离子柱层析及疏水柱层析，分离获得高纯的apoA-I溶液，但是该发明操作过程复杂，经济价值低。

本发明利用血浆生产中的废弃物组分IV，采取有机溶剂结合等电点沉淀法提取纯化载脂蛋白混合物，同时脱脂得天然重组高密蛋白纳米粒的脂质组分。通过乳化蒸发法、薄膜分散法及乳化蒸发改良法体外重组载抗肿瘤药物的天然重组脂蛋白纳米给药系统，可有效的改善重组单一脂蛋白来源有限，纳米粒肿瘤靶向低，肿瘤治疗效果弱等问题，其具备以下优势。

(1)高度仿生性：通过先拆分-后组装的方式体外还原天然脂蛋白为载体的给药系统具有高度仿生性的特点。体外利用有机溶剂结合等电点沉淀法从人血浆组分IV中提取载脂蛋白混合物，即将脂蛋白进行拆分，提纯载脂蛋白分离脂质；采用内源性脂蛋白的天然组分体外组装脂蛋白纳米粒，避免了外源性物质的介入；

(2)极强穿透性：颗粒粒径在纳米级范围，易从血管内扩散至血管外；

(3)高效运载性：核(亲脂)-壳(亲水)结构不仅有利于亲脂性药物的高效荷载，且可有效避免所载药物与血浆中成分相互作用而分解破坏；

(4)高度安全性：内源性纳米颗粒，具有良好的生物相容性、可生物降解、无免疫原性，避免被体内网状内皮系统(reticuloendothelial system，RES)识别而快速清除；

(5)肿瘤靶向性：重组天然脂蛋白纳米载体表面主要有apoA-I、载脂蛋白B-100(apoB-100)等载脂蛋白，可通过受体介导途径高效靶向于脂蛋白受体，转运大量脂蛋白纳米粒到达肿瘤部位，提高肿瘤部位对药物的摄取能力。