[发明专利]一种测定白酒中环二肽的方法

说明书

技术领域

本发明属于化学分析技术领域，具体涉及一种测定白酒中环二肽的方法。

背景技术

环二肽(cyclic dipeptides)又叫2，5-二酮哌嗪等衍生物(2,5-diketopiperazine derivatives)，该类化合物在人、脊椎动物、无脊椎动物、植物、真菌和细菌中均有发现，由于环二肽形成一个稳定的六元环结构，具有一定的构象约束作用，有两个氢键给体和两个氢键受体，氢键是药物与受体相互作用的主要方式之一，因而环二肽在药物化学中是一个重要的药效团。目前发现许多环二肽具有强的生理活性，引起了有机化学家、生物学家和药物学家的广泛兴趣。环二肽的报道不多，至今没有查到有关白酒中环二肽的报道。

白酒是中国的国粹，是传统固态发酵的产物，自然接种使大曲和酒糟中存在各种各样的微生物，其中不乏真菌和细菌，尤其是发酵后期以细菌为主，加上传统白酒独特的蒸馏工艺，高沸点的环二肽被带进入酒中，成为酒体的一部分。白酒中的环二肽种类很多，已检出二十多种，但通常含量很低，在ug/L级甚至更低，少数几个在mg/L级，从而为白酒中环二肽的检测带来了很大困难。

据有关报道，现有的检测技术主要采用LC-MS-MS、核磁质谱等仪器设备来检测，而针对白酒来说，其环二肽的相对含量较低，且样品中的风味物质很多，难以分离，不能像文献报道的进行纯化后进行核磁质谱检测；使用LC-MS-MS进行检测，由于其属于低分辨率高灵敏度的仪器，质量准确度小于2000ppm，对定性未知物易造成假阳性，必须使用标准品进行对照检测。所以，本领域急需寻找一种能够准确快速地检测白酒中环二肽的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种白酒中环二肽的检测方法。该方法包括以下步骤：

a、取白酒酒样，过SPE C18柱后，再用甲醇洗脱，洗脱液在温度不高于60℃下浓缩至原白酒酒样体积的1/50～1/10，得待测样品；

b、将步骤a的待测样品上样至液相-质谱(LC-QTOF)联用仪，质谱全离子扫描后，通过全离子扫描峰，初步得出可能存在的环二肽；

c、再将步骤a的待测样品上样至液相-质谱(LC-QTOF)联用仪，针对每一种步骤b初步得出可能存在的环二肽，通过选择离子检测后，得到特征离子峰；

d、根据步骤c得到的特征离子峰，进一步证明白酒中是否存在步骤b初步得出的环二肽，最后得出结论。

进一步的，上述方法中，当步骤b中出现的两个分子离子峰的相隔时间小于1min时，在步骤c进行选择离子检测时，对其中一个进行检测，再重复操作步骤c，对另一个进行检测。

进一步的，上述方法中，当步骤b中初步判断某一时间的峰为某种环二肽的分子离子峰时，步骤c中，则在此时间正负0.5min内用此种环二肽相应的碰撞能量进行选择离子检测。

进一步的，上述方法中，操作步骤c时，对于液相条件，控制液相条件与步骤b相同；对于质谱条件，除步骤b采用全离子扫描、步骤c采用选择离子检测外，控制其它条件与步骤b相同。

进一步的，上述方法步骤b或c中，液相色谱条件为：流动相：A为0.1％甲酸水溶液，B为甲醇，梯度洗脱为：0-18min：10～100％B；18.1-26min：100％B；26.1-30min：100～10％B；30.1-32min：10％B；32min：停止。

更进一步的，上述方法步骤b或c中，液相色谱条件为：色谱柱为C18柱，柱长100mm，内径2.1mm，柱温20～30℃，流速0.1mL/min，进样量为1～10uL。

更进一步的，上述方法步骤b或c中，液相色谱仪为美国Agilent公司1290系列高效液相色谱仪。

进一步的，上述方法步骤b中，质谱条件为：电喷雾离子源，正模式，全离子扫描，离子源温度280～325℃，干燥气流量5～12mL/min，雾化气压力30～40psig，毛细管电压4000v，毛细管出口电压60～150v。

进一步的，上述方法步骤c中，质谱条件为：电喷雾离子源，正模式，选择离子检测，离子源温度280～325℃，干燥气流量5～12mL/min，雾化气压力30～40psig，毛细管电压4000v，毛细管出口电压60～150v。

更进一步的，当步骤b中初步判断某一时间的峰为环(丙氨酸-脯氨酸)的分子离子峰时，步骤c中选择离子检测时所需的碰撞能量为18～22v。优选为20v。