[发明专利]多糖植物基因组DNA提取方法在审
申请号: | 201410471677.3 | 申请日: | 2014-09-16 |
公开(公告)号: | CN104313012A | 公开(公告)日: | 2015-01-28 |
发明(设计)人: | 张益文;杨敏生;王进茂;张军 | 申请(专利权)人: | 河北农业大学;张益文 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 北京世誉鑫诚专利代理事务所(普通合伙) 11368 | 代理人: | 孙国栋 |
地址: | 071000 河北*** | 国省代码: | 河北;13 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 多糖 植物 基因组 dna 提取 方法 | ||
1.一种多糖植物基因组DNA提取试剂盒,其包括至少两个缓冲液系统,其特征在于:该试剂盒能够有效充分地从多糖中提取分离DNA,避免多糖与DNA的共沉淀。
2.如权利要求1所述的试剂盒,其中至少两个缓冲液系统分别为缓冲液系统1和缓冲液系统2,缓冲液系统1中含有GuSCN及其酸性缓冲系统,缓冲液系统2中含有PVP及包括SLS的缓冲液系统。
3.如权利要求1或2中任一项所述的方法,其中缓冲系统1中不含有苯酚或氯仿或其它有毒有害物质。
4.如权利要求1-3中任一项所述的试剂盒,其包括:
缓冲液系统1:1-5M GuSCN;0.2-1M柠檬酸钠;0.1-0.5M柠檬酸;0.1-1.0M氯化钠0.2-0.8M乙酸钠(PH 4.2)冰乙酸;
缓冲液系统2:0.1%-3%PVP40;0.1%-2%SLS;0.2M-1M Tris-CL;0.2M-1M EDTA;
漂洗缓冲液系统1:2-6M GuHCL;0.2M-1M Tris-CL;0.2M-1MEDTA;0.14M氯化钠;45%无水乙醇;
漂洗缓冲液系统2:75%无水乙醇;
洗脱缓冲液系统:0.1倍TE溶液。
5.一种使用权利要求1-4中任一项的试剂盒的多糖植物基因组DNA提取步骤,包括:第一步,植物组织裂解,将研磨完成的植物组织加入到裂解缓冲液系统1中,56℃温浴10分钟,此步用于植物组织充分裂解,释放细胞内容物质,包括蛋白质,多糖,DNA及其它物质;第二步,多糖沉淀,将温浴完成的细胞裂解混合液加入到缓冲液系统2中,颠倒混匀多次,此步中,组织裂解缓冲液中的多糖充分与缓冲液系统2混合沉淀,分离DNA;第三步,混合液中加入无水乙醇沉淀DNA并结合硅胶膜离心吸附DNA;第四步,漂洗硅胶膜柱,清除蛋白质及其它抑制物;第五步,洗脱回收DNA。
6.一种多糖植物基因组DNA提取方法,其特征在于:该方法中使用包括至少两个缓冲液系统,能够有效充分地从多糖中提取分离DNA,避免多糖与DNA的共沉淀。
7.如权利要求6所述的方法,其中至少两个缓冲液系统分别为缓冲液系统1和缓冲液系统2,缓冲液系统1中含有GuSCN及其酸性缓冲系统,缓冲液系统2中含有PVP及包括SLS的缓冲液系统。
8.如权利要求6或7中任一项所述的方法,其中缓冲系统1不含有苯酚或氯仿或其它有毒有害物质。
9.如权利要求6-8中任一项所述的方法,其中缓冲液系统1包括:1-5M GuSCN;0.2-1M柠檬酸钠;0.1-0.5M柠檬酸;0.1-1.0M氯化钠0.2-0.8M乙酸钠(PH 4.2)冰乙酸。
10.如权利要求6-9中任一项所述的方法,其中缓冲液系统2包括:0.1%-3%PVP40;0.1%-2%SLS;0.2M-1M Tris-CL;0.2M-1M EDTA。
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