[发明专利]多糖植物基因组DNA提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种从富含多糖植物组织中提取DNA的技术。

背景技术

DNA是生物体中基本遗传物质，分离高质量DNA是现代分子生物学的关键技术，在包括农业，林业，医学等的领域，分离高质量DNA是各种分子生物学的关键步骤。因此，开发有效的DNA纯化方案需要进一步深入研究。传统的植物基因组DNA提取技术采用三组缓冲液系统并结合硅胶膜技术进行DNA分离纯化，此方法可以纯化部分植物组织DNA，但对于富含多糖组织的植物，很难从粘稠的多糖溶液中有效分离DNA，造成DNA损失，影响下游试验。

现有技术中具有代表性的是硅胶膜法植物基因组提取技术，其是利用硅胶模选择吸附特性并配合一定的裂解缓冲液系统，达到硅胶模对核酸的选择吸附效果，并有效去除蛋白质等其他杂质污染。现有的植物基因组提取系统一般包括缓冲液体系1，缓冲液体系2，缓冲液体系3及硅胶膜，缓冲液体系1一般含有Tris-cl，EDTA，SDS，用于植物组织裂解，缓冲液体系2及缓冲液体系3用于平衡整个缓冲体系PH值并沉淀核酸，并吸附于硅胶膜上，通过漂洗洗脱获得较纯的DNA溶液。由于硅胶模本身具有孔径小，通过率有限的缺点，导致富含多糖的组织通过常规裂解缓冲系统裂解后，大量多糖组分留出，造成多糖与基因组DNA共同存在与缓冲体系中，通过硅胶膜漂洗洗脱步骤后，基本无DNA存留。

本发明摒弃了以往的三组缓冲液系统，采用全新的两组缓冲液系统，能够从粘稠多糖溶液中有效分离植物基因组DNA，获得DNA纯度较高，可以广泛应用于PCR，克隆酶切，Northern blot等下游基因工程技术。

发明内容

本发明改变了传统的植物基因组提取的缓冲系统(仅有两个缓冲液体系)，能够有效去除植物组织中的多糖，并分离DNA，通过乙醇沉淀后吸附于硅胶膜柱上，通过漂洗洗脱步骤获得较纯的DNA溶液。

通过本发明可以有效的改变多糖与基因组DNA共沉淀的弊端，有效的从多糖组织中分离DNA。

本发明采用传统硅胶膜技术并结合独特缓冲液配方使基因组DNA提纯时间大大减少，纯度及稳定性提高，其原理如下：

本发明缓冲液系统1中含有GuSCN及其酸性缓冲系统，有效破碎细胞，组织并抑制各种核酸酶活性，防止核酸降解同时有效释放出基因组DNA。本裂解缓冲系统1中不含有苯酚氯仿等有毒有害物质，不会对环境造成污染。

本发明缓冲液系统2中含有PVP及SLS等缓冲液系统，有效的沉淀多糖植物组织中的多糖，并有效分离裂解释放出来的DNA，通过乙醇沉淀后结合吸附到硅胶膜上。

本发明另一目的是提供一种全新有效从多糖组织的粘稠溶液中分离基因组DNA的试剂盒，其包括以下成分：

A.缓冲液系统1：1-5M GuSCN；0.2-1M柠檬酸钠；0.1-0.5M柠檬酸；0.1-1.0M氯化钠0.2-0.8M乙酸钠(PH 4.2)冰乙酸

B.缓冲液系统2：0.1％-3％PVP40；0.1％-2％SLS；0.2M-1MTris-CL；0.2M-1M EDTA

C.漂洗缓冲液系统1：2-6M GuHCL；0.2M-1M Tris-CL；0.2M-1MEDTA；0.14M氯化钠；45％无水乙醇

D.漂洗缓冲液系统2：75％无水乙醇

E.洗脱缓冲液系统：0.1倍TE溶液

根据本发明所对应试剂盒提取步骤：

摒弃以往三步法提取过程，本发明仅需两部提取多糖含量较高的植物组织DNA，第一步，植物组织裂解，将研磨完成的植物组织加入到裂解缓冲液系统1中，56℃温浴10分钟，此步用于植物组织充分裂解，释放细胞内容物质，包括蛋白质，多糖，DNA等。第二步，多糖沉淀，将温浴完成的细胞裂解混合液加入到缓冲液系统2中，颠倒混匀多次，此步中，组织裂解缓冲液中的多糖充分与缓冲液系统2混合沉淀，分离DNA。第三步，混合液中加入无水乙醇沉淀DNA并结合硅胶膜离心吸附DNA。第四步，漂洗硅胶膜柱，清除蛋白质等抑制物。第五步，洗脱回收DNA。

本发明的方法没有从现有技术中得到启示，是本申请的申请人经过创造性劳动得到的非显而易见的技术方案。同时，与现有技术相比，本发明具有以下优点：

1、操作简单，提纯纯度高；

2、有效处理富含多糖植物组织；

3、步骤简化，缓冲体系中无有毒有害物质，不会污染环境。

上述优点也无法从现有技术中得出，可见本发明取得了预料不到的技术效果。

附图说明

图1表示传统植物基因组DNA提取技术流程；