[发明专利]包含具有与非纤维素物质降低的亲和力的纤维素酶变体的组合物和方法

权利要求书

1.分离的纤维素酶变体，其中所述变体是具有纤维素酶活性的成熟形态，并包含在一个或多个选自以下位置的取代：63、77、129、147、153、157、161、194、197、203、237、239、247、254、281、285、288、289、294、327、339、344、356、378和382，其中位置是通过与SEQ ID NO:3所述的参照纤维二糖水解酶II(CBH2)的氨基酸序列对应而编号的，且其中在一个或多个位置的取代导致纤维素酶变体与参照CBH2相比具有更负的净电荷。

2.权利要求1的分离的纤维素酶变体，其中在一个或多个位置的取代包括去除一个或多个正电荷。

3.权利要求2的分离的纤维素酶变体，其中去除一个或多个正电荷包括用中性氨基酸替换赖氨酸或精氨酸。

4.权利要求1的分离的纤维素酶变体，其中在一个或多个位置的取代包括添加一个或多个负电荷。

5.权利要求4的分离的纤维素酶变体，其中添加一个或多个负电荷包括用带负电荷的氨基酸替换中性氨基酸。

6.权利要求1的分离的纤维素酶变体，其中在一个或多个位置的取代包括去除一个或多个正电荷并添加一个或多个负电荷。

7.权利要求6的分离的纤维素酶变体，其中去除一个或多个正电荷并添加一个或多个负电荷包括用带负电荷的氨基酸替换赖氨酸或精氨酸。

8.权利要求1的分离的纤维素酶变体，其中在一个或多个位置的取代包括一个或多个的K129E、K157E、K194E、K288E、K327E、K356E、R63Q、R77Q、R153Q、R203Q、R294Q、R378Q、N161D、N197D、N237D、N247D、N254D、N285D、N289D、N339D、N344D、N382D、Q147E、Q204E、Q239E和Q281E，其中位置是通过与SEQ ID NO:3所述的参照纤维二糖水解酶II(CBH2)的氨基酸序列对应而编号的。

9.权利要求1的分离的纤维素酶变体，其中变体包括在一个或多个选自146、151、189、208、211、244、277和405的其它位置的其它取代，其中其它位置是通过与SEQ ID NO:3所述的参照纤维二糖水解酶II(CBH2)的氨基酸序列对应而编号的。

10.权利要求9的分离的纤维素酶变体，其中在一个或多个其它位置的其它取代包括用中性氨基酸替换天冬氨酸或谷氨酸。

11.权利要求9的分离的纤维素酶变体，其中在一个或多个其它位置的其它取代包括一个或多个的D151N、D189N、D211N、D277N、D405N、E146Q、E208Q和E244Q，其中位置是通过与SEQ ID NO:3所述的参照纤维二糖水解酶II(CBH2)的氨基酸序列对应而编号的。

12.权利要求1的分离的纤维素酶变体，其中在一个或多个位置的取代选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10个位置。

13.权利要求1的分离的纤维素酶变体，其中纤维素酶变体源自亲本纤维素酶，所述亲本纤维素酶选自红褐肉座菌(Hypocrea jecorina)CBH2、康宁肉座菌(Hypocrea koningii)CBH2、特异腐质霉(Humicola insolens)CBH2、解纤维素醋弧菌(Acremonium cellulolyticus)CBH2、二孢蘑菇(Agaricus bisporus)CBH2、尖镰孢(Fusarium osysporum)EG、黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)CBH2、埃默森篮状菌(Talaromyces emersonii)CBH2、褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida.fusca)6B/E3 CBH2、褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida.fusca)6A/E2 EG和粪肥纤维单胞菌(Cellulomonas fimi)CenA EG。