[发明专利]同步检测草莓疫霉和树莓疫霉的三重PCR引物及其扩增方法和用途有效
| 申请号： | 201410472466.1 | 申请日： | 2014-09-17 |
| 公开（公告）号： | CN104195259B | 公开（公告）日： | 2016-11-30 |
| 发明（设计）人： | 姜一;郭京泽;刘鹏;林宇;廖芳;李关荣;崔铁军;罗加凤 | 申请（专利权）人： | 天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/645 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300457 天津市滨*** | 国省代码： | 天津;12 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 同步 检测 草莓 树莓疫霉 三重 pcr 引物 及其 扩增 方法 用途 | ||
1.一种同步检测检疫性真菌病害草莓疫霉P. fragariae和树莓疫霉P. fragariae. rubi的三重PCR引物，实现了同时检测P. fragariae和P. rubi，引物序列如下：
通用引物：
18SUF：CGC GGT AAT TCC AGC TCC AAT A
18SUR：AGA ACA TCT AAG GGC ATC ACA GAC C
草莓疫霉特异引物：
PFSF：TGT ATA TTT AAT ACG TAA TTA GCT C
PFSR：AAT CTA TAT TGT TGT GAT AAA TG
树莓疫霉特异引物：
PRSF：ACT CCA TAA TAG ATA TAT ACG TG
PRSR：AAC CAC TTA ATG GAA AG
所述通用引物18SUF/18SUR扩增片段为884bp，作为DNA提取和扩增过程的质量控制；特异引物PFSF/PFSR扩增片段为615bp，PRSF/PRSR扩增片段为559bp，这三套特异引物用于草莓疫霉和树莓疫霉的菌丝基因组DNA特异三重PCR扩增。
2.一种权利要求1所述的同步检测草莓疫霉和树莓疫霉的三重PCR引物及其扩增方法，其特征在于，包括下述的扩增体系和扩增程序：
（1）扩增体系
建立30μL的扩增体系为，包括10×Buffer3.0μL（其中含终浓度为1.5mmol/L的MgCl2)；2.5mmol/L dNTPs 为2.0μL；0.4μL Taq DNA聚合酶(5U/μL)；浓度为10μmol/L的引物18SUF/18SUR、PRSF/PRSR和PFSF/PFSR依次为0.1μL/0.1μL、0.8μL/0.8μL、1.5μL/1.5μL；DNA模板1μL（约为20ng)，余量为双蒸水；
（2）反应程序
设立反应程序：94℃预变性4min；94℃变性30s，54℃复性40s，72℃延伸45s，35个循环；72℃延伸7min。
3.如权利要求1所述同步检测草莓疫霉和树莓疫霉的三重PCR引物及在检测冬草莓疫霉和树莓疫霉方面的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，未经天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201410472466.1/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
