[发明专利]一种枯草芽孢杆菌及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，其特征在于所述菌种的保藏号为CGMCC NO：9269。

2.如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述菌种属于细菌域(Bacteria)～厚壁菌门(Firmicutes)～芽孢杆菌纲(Bacilli)～芽孢杆菌目(Bacillales)～芽孢杆菌科(Bacillaceae)～芽孢杆菌(Bacillus)～枯草芽孢杆菌(B.subtilis)，菌种代号为M22，在自然界中以活芽孢形式存在。

3.如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述菌种的有效成分分析方法为：采用稀释平板法，将稀释后菌悬液定量接种于培养基中，待枯草芽孢杆菌在培养基内长出菌落，计数枯草芽孢杆菌菌落数，以测定样品的单位重量活芽孢数。

4.如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌，其特征在于：所述菌种能够用于制造孢子数为2000亿活芽孢/克的原粉，杂菌率≤5％。

5.一种如权利要求1至4任意一项所述的枯草芽孢杆菌的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)配制菌种

即将10个克氏瓶种子加无菌水做成菌悬液，在无菌条件下接种到大罐中；

(2)发酵培养基

将含量为2.0％～3.2％且细度大于80目的啤酒酵母粉、含量为1.0％～1.6％的工业级玉米淀粉、含量为0.2％～0.6％的工业级碳酸钙、含量为0.2％～0.6％的工业级磷酸二氢钾、含量为0.2％～0.6％的工业级硫酸铵和含量为0.02％～0.04％的工业级消泡剂放入灭菌后体积为发酵罐60％容积的罐中，灭菌前pH7.3～7.5；然后在0～6h这段时间内保持通气量为1∶0.6，在6～10h这段时间内保持通气量为1∶0.7，10h至放罐通气量为1∶1；在0～24h这段时间内温度为31℃～32℃，24h至放罐这段时间内温度为30℃～31℃，罐内压力为0.05MPa，搅拌转速为150r/min。

(3)后处理

即发酵38小时左右，镜检看到视野内80％以上的成熟孢子，放罐至调浆罐，调pH至5.0，加入辅料后喷雾干燥；

最后，按比例加入助剂形成制剂，加入助剂将原药稀释为100亿/克，助剂白炭黑为总质量的8％～12％，茶皂素为总质量的5％～8％，其余为硅藻土。

6.如权利要求5所述的枯草芽孢杆菌的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中所述辅料是由发酵液中干物质的质量百分数为：3％的木质素磺酸钠、3％的十二烷基磺酸钠、8％的氯化钠和0.5％的白炭黑组成。

7.如权利要求5所述的枯草芽孢杆菌的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中喷雾干燥在进风温度为140℃，出风温度为80℃下可制成孢子数为2000亿活孢子数/克的原粉。

8.一种如权利要求1至4任意一项所述的枯草芽孢杆菌的用途，其特征在于：所述菌种的摇培液对靶标菌水稻白叶枯病菌、靶标菌烟草青枯病菌、靶标菌烟草野火病菌、靶标菌柑橘溃疡病菌和靶标菌白菜软腐病菌均具有明显的抑制作用。