[发明专利]一种枯草芽孢杆菌及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种枯草芽孢杆菌及其制备方法和用途。

背景技术

细菌性病害是危害农作物生长的一类大病害，一直都严重危害着农业生产；目前，常用的防治细菌性病害的药剂主要是化学农药，而且对有些病害防治效果一般，对生态环境及农产品质量安全影响很大。在我国至今依然十分缺乏高效、广谱、低毒、低残留的以防治细菌性病害为主的生物农药。

枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种，其单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色，它通过竞争性生长繁殖占据生存空间的方式来阻止植物植物病原菌的生长，能在植物表面迅速形成一层保护膜，使农作物免受病原菌为害。枯草芽孢杆菌还能分泌抑菌物质，抑制病菌孢子发芽和菌丝生长。

现有技术还存在以下问题：

1、现有枯草芽孢杆菌制剂对水稻稻瘟病、水稻稻曲病、黄瓜白粉病、草莓灰霉病等多种真菌引起的植物病害有明显的防治效果，但是并没有厂家在细菌引起的病害上取得登记。

2、现有制备枯草芽孢杆菌的方法通常采用液体发酵取得发酵液，预处理后用碟式离心机浓缩，然后进行喷雾干燥得到原粉；发酵液经过碟式离心机分离，重液留下，轻液弃去，分离速度快但是收率低。

发明内容

针对以上问题，本发明提出了一种生长繁殖快、发酵周期短、下罐孢子数高和防治效果好，制备效率高，可以防治多种细菌性病害的枯草芽孢杆菌及其制备方法和用途。

本发明的技术方案如下：

上述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，其保藏号为CGMCC NO：9269。

所述枯草芽孢杆菌，其中：所述菌种属于细菌域(Bacteria)～厚壁菌门(Firmicutes)～芽孢杆菌纲(Bacilli)～芽孢杆菌目(Bacillales)～芽孢杆菌科(Bacillaceae)～芽孢杆菌(Bacillus)～枯草芽孢杆菌(B.subtilis)，菌种代号为M22，在自然界中以活芽孢形式存在。

所述枯草芽孢杆菌，其中，所述菌种的有效成分分析方法为：采用稀释平板法，将稀释后菌悬液定量接种于培养基中，待枯草芽孢杆菌在培养基内长出菌落，计数枯草芽孢杆菌菌落数，以测定样品的单位重量活芽孢数。

所述枯草芽孢杆菌，其中：所述菌种能够用于制造孢子数为2000亿活芽孢/克的原粉，杂菌率≤5％。

一种枯草芽孢杆菌的制备方法，其包括以下步骤：(1)配制菌种，即将10个克氏瓶种子加无菌水做成菌悬液，在无菌条件下接种到大罐中；(2)发酵培养基，即将含量为2.0％～3.2％且细度大于80目的啤酒酵母粉、含量为1.0％～1.6％的工业级玉米淀粉、含量为0.2％～0.6％的工业级碳酸钙、含量为0.2％～0.6％的工业级磷酸二氢钾、含量为0.2％～0.6％的工业级硫酸铵和含量为0.02％～0.04％的工业级消泡剂放入灭菌后体积为发酵罐60％容积的罐中，灭菌前pH7.3～7.5；然后在0～6h这段时间内保持通气量为1∶0.6，在6～10h这段时间内保持通气量为1∶0.7，10h至放罐通气量为1∶1；在0～24h这段时间内温度为31℃～32℃，24h至放罐这段时间内温度为30℃～31℃，罐内压力为0.05MPa，搅拌转速为150r/min。

(3)后处理，即发酵38小时左右，镜检看到视野内80％以上的成熟孢子，放罐至调浆罐，调pH至5.0，加入辅料后喷雾干燥；最后，按比例加入助剂形成制剂，加入助剂将原药稀释为100亿/克，助剂白炭黑为总质量的8％～12％，茶皂素为总质量的5％～8％，其余为硅藻土。

所述枯草芽孢杆菌的制备方法，其中，所述步骤(3)中所述辅料是由发酵液中干物质的质量百分数为：3％的木质素磺酸钠、3％的十二烷基磺酸钠、8％的氯化钠和0.5％的白炭黑组成。

所述枯草芽孢杆菌的制备方法，其中：所述步骤(3)中喷雾干燥在进风温度为140℃，出风温度为80℃下可制成孢子数为2000亿活孢子数/克的原粉。

一种枯草芽孢杆菌的用途，其中：所述菌种的摇培液对靶标菌水稻白叶枯病菌、靶标菌烟草青枯病菌、靶标菌烟草野火病菌、靶标菌柑橘溃疡病菌和靶标菌白菜软腐病菌均具有明显的抑制作用。

有益效果：

本发明枯草芽孢杆菌具有有生长繁殖快、发酵周期短、下罐孢子数高和防治效果好等优点。