[发明专利]一种普洱普鲁蓝菌及其培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种普洱普鲁蓝菌及其培养方法。

背景技术

蛋白酶是催化分解蛋白质肽键的一类酶，与人类的生活息息相关。在所有的工业用酶制剂中75％是蛋白水解酶，而蛋白酶是工业用酶中占据比例最大的酶类，大约占全世界每年总销售量的60％左右。由于微生物蛋白酶均为胞外酶且微生物菌体易于培养，因此与动、植物蛋白酶相比，具有下游处理技术相对简单，具有工业化大批量生产的优势。

蛋白酶在食品、酿造、医药、纺织、皮革、日用化学洗涤剂、饲料以及水产加工等多个行业有广泛应用，对国民经济的发展起着重要的作用。

目前，利用酶制剂来提高茶叶品质的方法已被认可。尤其是在普洱茶的加工中。普洱茶是以云南大叶种制成的晒青毛茶作为原料，经发水、渥堆、陈化及干燥工序精制而成的后发酵茶。在普洱茶的加工和贮存中，微生物自身包含的酶及代谢产生的胞外酶，如纤维素酶，果胶酶，多酚氧化酶和蛋白酶等使茶的内含物发生了变化，对普洱茶品质的形成有及其重要的作用。与传统工艺相比，在普洱茶加工中应用外源酶制剂不仅有利于开发出品种风味独特、功能各异的茶叶制品。并且能缓解微生物复杂的调控难题，可缩短加工时间，节约生产成本。

在茶叶加工过程中外源酶的研究中指出，蛋白酶能够促进茶叶蛋白质的水解，提高茶叶氨基酸和茶黄素的含量，缩短茶叶的发酵时间。蛋白酶在将蛋白质降解为胨、短肽的同时，还可能降解掉不溶性多酚类聚合物以及茶多糖中的蛋白质，导致茶多酚、可溶性糖和水浸出物的含量，提升茶叶的品质。

但目前应用于茶叶加工的蛋白酶主要是其他来源的蛋白酶，而来源于普洱茶发酵微生物的蛋白酶还未见报道。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种普洱普鲁蓝菌。

本发明的目的之二在于提供该普洱普鲁蓝菌的培养方法。

本发明所提供的细菌，被鉴定为普洱普鲁蓝菌(Pullulanibacillus pueri)，来源于陈熟普洱茶。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种普洱普鲁蓝菌YN3，该菌株的保藏号为CGMCC No.1.12777。

一种培养上述的普洱普鲁蓝菌YN3的方法，其特征在于该方法是：将普洱普鲁蓝菌YN3接种于CYC培养基，在25-50℃，pH4.0～8.0的条件下进行培养；所述CYC培养基的组成及含量为：每1000mlCYC液体培养基含有：NaNO₃ 3.0g，KH₂PO₄ 1.0g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO₄·7H₂O 0.01g，蔗糖30g，Yeast extract 2.0g和Casamino acids 6.0g。

上述培养温度为30～37℃。

上述pH为5.0～6.0。

一种根据上述的普洱普鲁蓝菌在液体发酵生产蛋白酶中的应用。

所述普洱普鲁蓝菌(Pullulanibacillus pueri)YN3，它于2014年5月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心地址是中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No.1.12777。

取普洱熟茶浸出液，将其稀释涂布于LB固体培养基中，30℃培养2-3天，挑取单菌落，然后划线纯化得到。

本发明所提供的普洱普鲁蓝菌YN3具有以下特征：

1)菌落特征：菌落直径为3.0mm，菌落呈圆形，表面光滑湿润，边缘整齐，凸起，黄色或白色。

2)细胞形态特征：细胞为短杆或弯曲状，顶端圆钝；革兰氏染色阳性；细胞菌体大小为0.5-0.6μm×1.0-2.6μm，单生或成簇。产端生芽孢，胞囊膨大。

3)生理生化特征：好氧生长；接触酶阳性；核酸酶阴性；水解七叶灵；液化明胶；水解酪蛋白；不水解普鲁蓝多糖；不水解淀粉；不还原硝酸盐；能利用葡萄糖、木糖、半乳糖、蔗糖、甘露糖、甘露醇、糖原、甘油、麦芽糖、乳糖、L-阿拉伯糖、核糖、肌醇、果糖、山梨醇、鼠李糖、海藻糖、苦杏苷作为碳源；不利用D-阿拉伯糖、木糖醇、甲酸、甲醇、乙酸钠、酮戊二酸、延胡索酸、L-鸟氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-天冬氨酸、L-丙氨酸、DL-天冬酰胺、甘氨酸、赖氨酸与组氨酸。

普洱普鲁蓝菌YN3的16S rDNA基因序列长度为1553bp。其16S rDNA基因的核苷酸序列间SEQ ID NO.1所示的碱基序列。