[发明专利]一株水解米渣的蛋白酶产生菌：枯草芽孢杆菌及其筛选与使用方法

说明书

本发明公开了一株水解米渣的蛋白酶产生菌：枯草芽孢杆菌及其筛选和使用方法，该枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）菌株纯培养物于2014年5月13日保藏于武汉中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉·武汉大学，邮编430072，简称枯草芽孢杆菌HP90，保藏编号CCTCC NO.M 2014201。通过初筛和复筛筛选得到目标菌株。取斜面保藏菌株培养后，即直接用于米渣中蛋白质的水解。枯草芽孢杆菌HP90用于米渣蛋白水解，水解度达19.83％。该菌株成本低、能循环利用、稳定性好、绿色安全、能直接用于生物催化，原料来源广泛，方法简单实用，因此，该菌株具有重要应用前景，还可应用于其他蛋白质的水解。

技术领域

本发明涉及微生物或酶，特别涉及蛋白酶产生菌。

背景技术

稻谷，在植物学上属禾本科稻属普通栽培稻亚属种的普通稻亚种，是全球第一大粮食品种。稻谷的年均产量大约占到了全国粮食总产量的2/5，达到了1.90亿t。米渣是以早籼米、碎米、陈化米等为原料进行发酵和生产糖浆、味精、生化药品等过程中被过滤掉米浆后剩下的残渣，价格低廉，产量巨大，在大米淀粉糖的生产过程中每消耗7t大米就要产生1t米渣。米渣中蛋白质含量约为40％～70％，相当于稻谷中蛋白质含量的5～8倍，其含量接近大豆，而且氨基酸配比符合WHO/FAO推荐的理想模式，其品质被公认为粮食种子蛋白中的最佳者。但是这些优质的蛋白质资源大部分都以干粉的形式廉价的卖给了饲料厂做饲料，并没有得到深度开发和利用，若将这些米渣蛋白资源转化成具有高附加值的氨基酸和多肽，不但能提高其生物效价、经济价值，对提高我国稻谷深加工的技术含量，以及促进整个粮食产业的发展都有着深远的影响。

蛋白质经酸、碱或者蛋白酶处理可获得氨基酸和多肽。酸、碱水解作用强烈会破坏一些敏感氨基酸，并且生成有毒的氯丙醇类物质。酶水解条件温和，对敏感氨基酸无破坏，能最大保留原料理化性质、风味、功能特性、绿色安全，能耗小。可是目前多数利用商品蛋白酶水解蛋白质，这使得工业化生产成本较高，因此，筛选蛋白酶产生菌尤为重要。

目前中国专利数据库中，涉及蛋白酶产生菌的专利申请件不多，仅有ZL2010101038046号《一种耐有机溶剂蛋白酶产生菌及其所产耐有机溶剂蛋白酶的基因和应用》、2007101919691号《一种耐有机溶剂碱性蛋白酶产生菌以及该耐有机溶剂碱性蛋白酶的基因和应用》和2013101991045号《一种胶原蛋白酶产生菌》。至今为止，尚无涉及水解米渣的蛋白酶产生菌的申请件。

发明内容

本发明旨在提供一株水解米渣的蛋白酶产生菌：枯草芽孢杆菌，使之能够用于米渣蛋白的生物法水解。

本发明的又一目的是提供上述枯草芽孢杆菌的筛选方法及使用方法，使其具备特定的工业用途。

为达到上述目的，发明人提供一株水解米渣的蛋白酶产生菌是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，该菌株纯培养物已经于2014年5月13日保藏于武汉中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：中国武汉·武汉大学，邮编430072，保藏编号为CCTCC NO.M2014201。该菌株简称枯草芽孢杆菌HP90，系从中国贵州传统腊肠中分离得到。

上述枯草芽孢杆菌HP90形态特征和生理生化特征接近芽孢杆菌属，枯草芽孢杆菌HP90的16S rRNA序列与Bacillus subtilis ATCC 6051(AJ276351)序列同源性在99％以上，看家基因recA序列与Bacillus subtilis subsp.subtilis RO-NN-1(CP002906.1)序列同源性达99％。根据≤伯杰氏系统细菌学手册≥中芽孢杆菌属的分类概况，HP90属芽孢杆菌纲(Bacilli),芽孢杆菌目(Bacillales)，芽孢杆菌科(Bacillaceae),芽孢杆菌属(Bacillus)，枯草芽孢杆菌种(Bacillus subtilis)。