[发明专利]一种牡丹花托愈伤组织诱导及分化不定芽方法有效

专利信息
申请号: 201410478283.0 申请日: 2014-09-12
公开(公告)号: CN104285787B 公开(公告)日: 2017-05-17
发明(设计)人: 贾文庆;陈韵;穆金艳;刘会超;王艳丽;林紫玉;王少平 申请(专利权)人: 河南科技学院
主分类号: A01H4/00 分类号: A01H4/00
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 453003 河南省新乡*** 国省代码: 河南;41
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摘要:
搜索关键词: 一种 牡丹 花托 组织 诱导 分化 不定 方法
【说明书】:

技术领域

发明属于植物组织培养技术领域,具体涉及一种牡丹花托愈伤组织诱导及分化不定芽方法。

背景技术

牡丹(Paeonia suffruticosa)是世界著名花卉,素有″国色天香″、″花中之王″的美称,其花大、形美、色艳、香浓,为历代人们所称颂,具有很高的观赏和药用价值,在园林应用中占有重要位置。在一些重要的观赏植物如兰花上,组织培养技术已开始应用,并大规模商品化生产,同时利用转基因技术向矮牵牛等观赏植物中导入目的基因已经培育出转基因新品系,这为利用转基因技术获得抗逆性强、花色特异的牡丹新品系提供了可能。自上世纪80年代以来牡丹组织培养的研究在国内外蓬勃开展,但是至今未能获得根本性的突破。研究表明牡丹组培苗形成途径主要以愈伤组织脱分化为主,愈伤组织的质量是脱分化的基础。牡丹体内由于存在较高的酚类物质,存在愈伤组织较难诱导、诱导率低,形成的愈伤组织质量差等问题,导致牡丹愈伤组织诱导与再生的研究进展缓慢。截至目前,以牡丹的胚、子叶、叶片、叶柄、花瓣为外植体进行愈伤组织的诱导已有一些报道,但在离体诱导牡丹花托愈伤组织及分化不定芽方面尚未见进展,因此,以花托为外植体,提高牡丹愈伤组织诱导率、诱导质量及不定芽分化率,将在很大程度上促进牡丹产业的发展,带来巨大的经济效益。

发明内容

本发明是为了克服现有技术的不足,建立一种牡丹花托愈伤组织诱导及分化不定芽方法,提高牡丹愈伤组织的诱导率、诱导质量及不定芽分化率,为深入开展牡丹生物技术育种研究提供一种新的技术平台。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:首先,选取适合的牡丹花托外植体,进行预处理及常规消毒;然后,对外植体进行初始愈伤组织的诱导,获得初始愈伤组织;再次,对初始愈伤组织进行增殖培养,使愈伤组织快速增殖;最后,对增殖的愈伤组织进行不定芽分化诱导,已达到再生的目的。

本发明所述牡丹花托愈伤组织诱导及分化不定芽方法包括如下步骤:

1)花托外植体的选取与消毒:选取直径为0.5~0.6cm的花蕾,4℃冰箱预处理5~6d后,常规消毒,剥取无菌花托,花托直径为0.3~0.5cm;

2)启动培养:将无菌花托在启动培养基上暗培养一周,然后转至弱光下培养30~50d,产生初始愈伤组织;弱光下的培养条件为:培养温度25±1℃,光照14h/d,弱光光照强度800~1000Lx;所述启动培养基为MS+2,4-D 0.5~1.0mg/L+KT 2.0~2.5mg/L+谷氨酰胺0.5g/L+丝氨酸0.1g/L;

3)增殖培养:将初始培养获得的愈伤组织,转接到增殖培养基中进行增殖培养;培养条件为:培养温度25±1℃,光照14h/d,光照强度1500Lx;所述增殖培养基为MS+2,4-D 0.5~1.0mg/L+KT 1.5~2.0mg/L+NAA 1.5~2.0mg/L+谷氨酰胺0.5g/L+丝氨酸0.1g/L;

4)不定芽分化培养:将初始培养或增殖培养获得的愈伤组织,转接到不定芽分化培养基上弱光环境培养4d,然后置于正常环境下培养;所述不定芽分化培养基为MS+ZT2.0~3.0mg/L+6-BA 10.0~15.0mg/L+水解乳蛋白10.0mg/L。

作为一种优选方案,所述花托直径为0.3~0.5cm,所述步骤2)中,所述启动培养基为MS+2,4-D 0.8mg/L+KT 2.3mg/L+谷氨酰胺0.5g/L+丝氨酸0.1g/L;所述初始愈伤组织培养环境为弱光:光照强度800~1000Lx。

作为一种优选方案,所述步骤3)中,所述增殖培养基为MS+2,4-D 0.8mg/L+KT 1.5mg/L+NAA 2.0mg/L+谷氨酰胺0.5g/L+丝氨酸0.1g/L;所述步骤4)中,所述不定芽分化培养基为MS+ZT 2.5mg/L+6-BA 12.0mg/L+水解乳蛋白10.0mg/L。

作为一种优选方案,所述步骤4)中,所述弱光环境培养条件为:培养温度15±1℃,光照14h/d,光照强度500~600Lx;所述步骤4)中,所述正常环境培养条件为:培养温度20±1℃,光照14h/d,光照强度2000Lx。

上述各种培养基,均以MS为基本培养基,含琼脂5.4g/L、蔗糖30g/L,培养基灭菌前pH为5.8~6.0。

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