[发明专利]一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法

权利要求书

1.一种金叶龟甲冬青组培繁殖的培养基配方，其特征在于：

初代培养基：包括MS+玉米素 0.5-1.0mg/L＋萘乙酸0.1mg/L＋蔗糖25mg/L＋琼脂7mg/L，且培养基的pH值为5.6～5.8；

继代培养基：包括MS+玉米素 0.5mg/L＋萘乙酸0.2mg/L＋蔗糖25mg/L＋琼脂7mg/L，且培养基的pH值为5.6～5.8；

壮苗培养基：包括MS+玉米素 0.5mg/L＋萘乙酸0.2mg/L＋蔗糖30mg/L＋琼脂7mg/L，且培养基的pH值为5.6～5.8；

生根培养基：包括1/2MS＋吲哚丁酸0.1mg/L+萘乙酸0.5mg/L+活性炭3g/L＋蔗糖20g/L，且培养基的pH值为5.6～5.8；

栽培基质：包括土壤、蛭石、泥炭，土壤、蛭石、泥炭按体积比2:1:1充分混匀。

2.根据权利要求1所述的一种金叶龟甲冬青组培繁殖的培养基配方，其特征在于，所述土壤为经耕作并栽培过花木、蔬菜的土壤。

3.一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）消毒灭菌，选取金叶龟甲冬青的幼嫩茎段为外植体，用水清洗干净后，用消毒液消毒；

2）初代培养，将消毒灭菌后的金叶龟甲冬青外植体接种在初代培养基上，无菌培养室培养30d；

3）继代培养，将初代培养得到的芽苗切成带腋芽的长0.5cm的茎段，接种在继代培养基上，无菌培养室培养25d-35d，长成0.8-1.2cm的丛生芽苗；

4）壮苗培养，将继代培养基上的丛生芽苗切下后接种在壮苗培养基上，无菌培养室培养20d-30d；

5）生根培养，当壮苗培养基上的芽苗长至3-4㎝时，转移到生根培养基上培养，无菌培养室培养40d-50d；

6）炼苗，将经过生根培养的组培苗连同生根培养基移至温度23±2℃的温室内放置3d-5d天；

7）移栽，将幼苗取出，用水将组培苗根部的培养基清洗干净，种入铺有栽培基质的苗床，大棚栽培20d-30d。

4.根据权利要求3所述的一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法，其特征在于，所述步骤1）中用消毒液消毒，过程为先用体积浓度75%酒精浸泡20s，用无菌水冲洗外植体至少3次，每次冲洗时间不少于5min；再转入质量浓度0.1% 的升汞溶液（HgCl₂）浸泡8-9min，用无菌水冲洗干净后，用灭菌纸将外植体表面的水分吸干。

5.根据权利要求3所述的一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法，其特征在于，所述步骤2）中培养条件为：温度20±2℃、光照强度1000~1500lx、光照时间10~12h/d、培养地点无菌培养室。

6.根据权利要求3所述的一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法，其特征在于，所述步骤3）、4）、5）中培养条件为：温度25±2℃、光照强度1500~2000lx、光照时间12~14h/d、培养地点无菌培养室。

7.根据权利要求3所述的一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法，其特征在于，所述步骤3）中每25d-35d将长出的丛生芽苗切下，继续继代培养一次，继代培养3次后，进行壮苗培养。

8.根据权利要求3所述的一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法，其特征在于，所述步骤7）中移栽后喷施稀释800-1000倍的甲基托布津或1000倍多菌灵药液，每隔一周喷施一次，连续3-4次。

9.根据权利要求3所述的一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法，其特征在于，所述步骤7）中移栽初期7d-10d内，全封闭管理并遮阴，保持苗床和空气的湿度在85~95%，温度为23±2℃。