[发明专利]一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法

说明书

技术领域

本涉及冬青繁殖领域，尤其涉及一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法。

背景技术

金叶龟甲冬青是冬青科冬青属彩叶植物，具有常绿、耐低温、植株低矮紧凑等特点。是我国是近几年从国外引进的彩叶新品种，其老叶片浓绿具光泽，新叶片金黄色，色泽极其亮丽。近年来龟甲冬青在国内外绿化产业中需求旺盛，因此应加快其繁殖速度，满足其日益增加的市场需求。金叶龟甲冬青的常规繁殖方法有扦插繁殖和嫁接繁殖，扦插繁殖的繁殖周期为1年左右，成活率90%左右，繁殖系数小于等于1；嫁接繁殖的繁殖周期为一年以上，成活率60%-80%左右，繁殖系数小于等于1，由于其繁殖速度较慢，繁殖系数和成活率低限制了它的推广应用。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法，通过组培繁殖来提高金叶龟甲冬青的繁殖系数、繁殖速度。

为达到上述目的，本发明是通过以下的技术方案来实现的，一种金叶龟甲冬青组培繁殖方法，包括以下步骤：

1）消毒灭菌，选取金叶龟甲冬青的幼嫩茎段为外植体，用水清洗干净后，用消毒液消毒；

2）初代培养，将消毒灭菌后的金叶龟甲冬青外植体接种在初代培养基上，无菌培养室培养30d，；

3）继代培养，将初代培养得到的芽苗切成带腋芽的长0.5cm的茎段，接种在继代培养基上，无菌培养室培养25d-35d，长成0.8-1.2cm的丛生芽苗；

4）壮苗培养，将继代培养基上的丛生芽苗切下后接种在壮苗培养基上，无菌培养室培养20d-30d；

5）生根培养，当壮苗培养基上的芽苗长至3～4㎝时，转移到生根培养基上培养，无菌培养室培养40d-50d；

6）炼苗，将经过生根培养的组培苗连同生根培养基移至温度23±2℃的温室内放置3d-5d天；

7）移栽，将幼苗取出，用水将组培苗根部的培养基清洗干净，种入铺有栽培基质的苗床，大棚栽培20d-30d。

其中初代培养基：包括MS+玉米素（ZT ）0.5-1.0mg/L＋萘乙酸（NAA）0.1mg/L＋蔗糖25mg/L＋琼脂7mg/L，且培养基的pH值为5.6～5.8；

继代培养基：包括MS+玉米素（ZT ） 0.5mg/L＋萘乙酸（NAA）0.2mg/L＋蔗糖25mg/L＋琼脂7mg/L，且培养基的pH值为5.6～5.8；

壮苗培养基：包括MS+玉米素（ZT ） 0.5mg/L＋萘乙酸（NAA）0.2mg/L＋蔗糖30mg/L＋琼脂7mg/L，且培养基的pH值为5.6～5.8；

生根培养基：包括1/2MS＋吲哚丁酸（IBA）0.1mg/L+萘乙酸（NAA）0.5mg/L+活性炭3g/L＋蔗糖20g/L，且培养基的pH值为5.6～5.8；

栽培基质：包括土壤、蛭石、泥炭，土壤、蛭石、泥炭按体积比2:1:1充分混匀。

所述土壤采用经耕作并栽培过花木、蔬菜的土壤，土壤成分和结构适于金叶龟甲冬青的生长，有利于移栽幼苗的成活。

所述步骤1）中用消毒液消毒，过程为先用体积浓度75%酒精浸泡20s，用无菌水冲洗外植体至少3次，每次冲洗时间不少于5min；再转入质量浓度0.1% 的升汞溶液（HgCl₂）浸泡8-9min，用无菌水冲洗干净后，用灭菌纸将外植体表面的水分吸干。

步骤2）中培养条件为：温度20±2℃、光照强度1000~1500lx、光照时间10~12h/d、培养地点无菌培养室。

所述步骤3）、4）、5）中培养条件为：温度25±2℃、光照强度1500~2000lx、光照时间12~14h/d、培养地点无菌培养室。

步骤3）中每25d-35d将长出的丛生芽苗切下，继续继代培养一次，继代培养3次后，进行壮苗培养。通过反复切割，继代培养后增殖倍数可达5倍左右。

步骤7）中移栽后喷施稀释800-1000倍的甲基托布津或1000倍多菌灵药液，每隔一周喷施一次，连续3-4次。

步骤7）中移栽初期7d-10d内，全封闭管理并遮阴，保持苗床和空气的湿度在90%左右，温度为23±2℃。

有益效果：与现有技术相比，本发明的优点在于：

1）提高金叶龟甲冬青的繁殖系数，繁殖系数可达4-6倍；

 2）加快金叶龟甲冬青的繁殖速度，繁殖周期缩短至200-233d；

 3）提高金叶龟甲冬青的成活率，成活率达到93-95%。

具体实施方式