[发明专利]循环癌细胞的KRAS致癌基因检测方法

权利要求书

1.一种循环癌细胞的KRAS致癌基因检测方法，其至少包含 下列步骤：

(A)检体前处理步骤：收集待检测的检体，磁珠纯化萃取得该 检体中的讯息核醣核酸，将此讯息核醣核酸经由反转录为互补脱 氧核醣核酸后，再以酵素标定成探针；

(B)制备活化型KRAS检测芯片步骤：将包含22个目标基因、 一组空白对照组及一组内部对照组三重复点阵于一基材上，在该 基材上形成被覆有标定特定核苷酸探针序列的活化型KRAS检测 芯片，其中该22个目标基因为ATP2A2、ATP6V0B、BCL2、CALM2 、CEBPB、CLSTN1、COL4A1、CXCL11、CXCR4、CYR61、DVL3、 E2F4、ETS1、H2AFZ、L1CAM、LRP1、RAP1B、RPL30、SLC25A5、 SPP1、TAF12及TBX19；

(C)杂合反应步骤：将A步骤的探针与该活化型KRAS检测芯 片进行杂合反应，使该活化型KRAS检测芯片表面的标定特定核 苷酸探针序列与该A步骤的探针上的酵素进行杂合处理，并将未 反应的探针由芯片上洗净；

(D)芯片呈色步骤：将该活化型KRAS检测芯片上杂合后的探 针加上呈色剂二氨基联苯胺进行呈色反应；以及

(E)分析判读步骤：撷取该活化型KRAS检测芯片呈色反应后 的影像，并对呈色反应后的影像结果进行自动化分析，将分析后 所得的侦测值以基因加权计算方式，依据每个基因对于疾病形成 或抗药性发生的重要性给予个别加权分数，再经由阳性反应基因 点乘上基因点的加权值而得到芯片的总分。

2.如权利要求1所述的循环癌细胞的KRAS致癌基因检测方 法，其特征在于，所述活化型KRAS检测芯片上所有的基因位点 呈数组排列状。

3.如权利要求1所述的循环癌细胞的KRAS致癌基因检测方 法，其特征在于，所述活化型KRAS检测芯片的内部对照组为 β-肌动蛋白。

4.如权利要求1所述的循环癌细胞的KRAS致癌基因检测方 法，其特征在于，所述检体为血液、体液、细胞培养或组织细胞 。

5.如权利要求1所述的循环癌细胞的KRAS致癌基因检测方 法，其特征在于，所述步骤(F)系给予该22个目标基因总加 权分数为58，当中ATP2A2、CXCR4、RAP1B、ATP6V0B、CYR61与 RPL30加权分数为4分；BCL2、DVL3、SLC25A5、CALM2、E2F4与 SPP1加权分数为3分；CEBPB、ETS1、TAF12、CLSTN1、H2AFZ与 TBX19加权分数为2分；以及COL4A1、L1CAM、CXCL11与LRP1 加权分数为1分。

6.如权利要求1所述的循环癌细胞的KRAS致癌基因检测方 法，其特征在于，所述步骤(F)以接受者操作特性曲线方式算 出该活化型KRAS检测芯片的阳性反应的边界值。

7.如权利要求6所述的循环癌细胞的KRAS致癌基因检测方 法，其特征在于，所述阳性反应的边界值为20。

8.如权利要求1所述的循环癌细胞的KRAS致癌基因检测方 法，其特征在于，所述基材为玻璃、聚碳酸酯或尼龙膜。

9.如权利要求1所述的循环癌细胞的KRAS致癌基因检测方 法在评估标靶药物-cetuximab疗效中的应用。