[发明专利]循环癌细胞的KRAS致癌基因检测方法

说明书

技术领域

本发明有关于一种循环癌细胞的KRAS致癌基因检测方法，尤指涉及一种利用加权型酵素芯片操作平台(WeightedEnzymaticChipArray,WEnCA)，并合并加权因素的概念算法所成的方法，特别可用以评估标靶药物-cetuximab疗效。

背景技术

对基因过渡表现(Overexpression)的分析已经导致疾病诊断的基本进步与临床进展。而研究基因过渡表现的技术包含有北方墨点法(NorthernBlot)、反转录聚合酶链锁反应(ReverseTranscriptionPolymeraseChainReaction,RT-PCR)及实时定量聚合酶链锁反应(Real-TimePCR)。其中NorthernBlot由于操作步骤十分敏琐，所需检体量又过多，因此仅限于研究操作上，无法实际应用于临床诊断。至于RT-PCR及Real-TimePCR由于操作步骤简便，因此在单一基因检测的应用上，使用相当广泛，例如肝炎病毒的检测及感染症病原菌的鉴定。然而，虽然PCR序列的创作是作为整体最伟大之实验，但多数PCR技术仍保有特定的共同问题，其主要问题包含有：其一系污染，过渡灵敏侦察的伪阳性，例如雾式的DNA或先前的样品残余；其二是RT-PCR仅被认为半定量，因为当比较不同的样品时，难以控制序列放大的效率；以及其三是由于所需引子(Primer)间黏合(Annearling)的干扰，无论RT-PCR或Real-TimePCR都仅广泛应用于单一基因标的检测，当检测标的为基因群时，则PCR相关的技术则有操作耗时、费事及高成本等缺点。

随着近几年来生物科技的快速发展，生物芯片于临床医学诊断或药效评估上的应用逐渐被重视，本发明的先前研究已开发并且评估一尼龙膜芯片(MembraneArray)方法，能使用于癌症诊断，在血液检体(PeripheralBlood)中同时查出一多种mRNA标记引物的表达水平。其分子标志的表达水平由RT-PCR与尼龙膜芯片评估，数据从RT-PCR与尼龙膜芯片取得，且受制于线性回归分析，显示在这两个方法结果之间的高度相互关系(r＝0.979，P<0.0001)。另外，以相关衍生技术的加权化学冷光型基因芯片(WeightedChemiluminescentMembraneArray,WCHMA)用于肺癌(LungCancer)患者的血液检体分析标的治疗药物(TargetTherapeuticDrug)的作用标的K-ras的异常情形，也已被接受刊登于肺癌期刊中。

虽然尼龙膜芯片于分子诊断及药效评估上的应用已有许多报告提出，然而，由于原始尼龙膜芯片所使用判读方法上，对于每一基因在特定疾病的重要性皆等值的概念下，造成检测特异性在达到一定程度之后便不易提升。另外，由于呈色型芯片(ColorimetricBiochip)操作平台所需使用的洋地黄毒(Digoxigenin)系统成本十分昂贵，导致检测成本过高，再加上芯片操作的高技术门坎，使得即使目前已经发展及评估成熟的诊断芯片仍不易普及于临床医学应用。故，一般无法符合使用者于实际使用时所需。

发明内容

本发明的主要目的在于，克服已知技术所遭遇的上述问题并提供一种一种循环癌细胞的KRAS致癌基因检测方法，是利用加权型酵素芯片操作平台(WeightedEnzymaticChipArray,WEnCA)，并合并加权因素的概念算法所成的检测方法，可用以评估标靶药物-cetuximab疗效。