[发明专利]缓释氯己定无定形磷酸钙纳米颗粒的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种负载氯己定的无定形磷酸钙纳米颗粒及其制备方法，特别涉及一种可用于保护牙本质I型胶原，促进其再矿化的负载氯己定无定形磷酸钙纳米颗粒的制备方法。

背景技术

粘接酸蚀牙本质或累及牙本质的龋坏均存在暴露的胶原纤维被基质金属蛋白酶(MMPs)破坏的问题，这将导致粘接界面和牙本质的破坏。研究者们不断试图通过仿生矿化手段促进暴露的胶原纤维再矿化，使足够小的羟基磷灰石晶体替换胶原纤维网纤维内外的水分，避免胶原纤维的暴露和酶解。无定形磷酸钙是羟基磷灰石形成过程中的一种无定形中间相，存在于牙本质形成的初始阶段。通过这一中间相的转变，生物体可以克服经典晶体成核需要的能垒，从而更为高效地合成羟基磷灰石。研究表明，无定形磷酸钙及其复合材料无细胞毒性，生物活性良好、细胞黏附性高，能够促进细胞增殖、提高碱性磷酸酶活性并促进骨桥蛋白的合成，目前广泛应用于生物医学领域，包括用于骨科材料、组织工程支架、释药载体等。然而胶原纤维再矿化过程缓慢，矿化过程中胶原纤维容易被持续作用的MMPs破坏，使再矿化过程缺乏模板而失败。氯己定是最常被研究的MMPs抑制剂，可以有效防止胶原纤维降解，只是目前研究大多使用氯己定溶液，无法长期有效发挥作用。

为此，本发明拟将上述两种问题结合，通过制备负载氯己定的无定形磷酸钙纳米颗粒，期望实现氯己定的缓释，从而实现牙本质再矿化过程中长期有效保护胶原纤维，提高再矿化的时效性。所用设备简单，方法易行。

发明内容

本发明提供一种负载氯己定无定形磷酸钙纳米颗粒的制备方法，产物尺寸小，外形为较规则的球形，长效释放氯己定和钙磷离子，并能随pH降低加快释放钙磷离子的速度，可能应用于口腔直接粘接修复材料领域。

牙本质胶原纤维仿生矿化过程中，胶原纤维易受到MMPs酶的降解，导致胶原纤维仿生矿化失败。氯己定可以抑制MMPs酶的活性，从而保护胶原纤维。本发明通过研制负载氯己定的无定形磷酸钙纳米颗粒，提高牙本质仿生矿化的时效性。

本发明的方法特点是可以在仿生矿化过程中，利用氯己定保护胶原纤维，使胶原纤维仿生矿化得以顺利进行。

本发明的缓释氯己定无定形磷酸钙纳米颗粒(也称无定形磷酸钙纳米球)。本发明以可溶性钙盐和可溶性磷酸盐作为钙磷源，包覆醋酸氯己定或葡萄糖酸氯己定，以聚丙烯酸作为稳定剂，以非离子表面活性剂囊泡为模板制得所述无定形磷酸钙纳米颗粒。具体的，本发明的方法包括下述步骤：

1)制备含氯己定的非离子表面活性剂囊泡悬浮液；

2)在搅拌下，在步骤1)制备的非离子表面活性剂囊泡的悬浮液体系中加入可溶性钙盐溶液和磷酸盐溶液，反应得到无定形磷酸钙纳米颗粒的悬浮液；

3)在所述步骤2)得到的磷酸钙纳米颗粒的悬浮液中加入不同浓度稳定剂，搅拌均匀，然后离心得到沉淀，将沉淀洗涤、真空干燥得到无定形磷酸钙纳米颗粒。

本发明原理首先通过调整制备过程中氯己定溶液的浓度，得到不同载药量的负载氯己定无定形磷酸钙纳米颗粒，以期实现氯己定在胶原纤维再矿化过程中的持续保护作用。其次，超声形成的纳米尺寸非离子表面活性剂囊泡能够作为模板，辅助磷酸钙包覆氯己定，之后去除模板，得到纳米颗粒。

所述步骤1)中，所述含氯己定的非离子表面活性剂囊泡的悬浮液中，所述氯己定的质量百分浓度为2-20％；可根据所需载药量进行调整。

所述步骤1)中，制备非离子表面活性剂囊泡的悬浮液的方法包括制备含有非离子表面活性剂(如Span80或Tween80)、氯己定(不同浓度的醋酸氯己定或葡萄糖酸氯己定)和聚乙二醇的溶液，超声得到纳米尺寸非离子表面活性剂囊泡的悬浮液；所述非离子表面活性剂为Span80或Tween80；所述氯己定为醋酸氯己定或葡萄糖酸氯己定。所述氯己定与Span80或Tween80的重量比不限。

所述步骤1)中，所述超声步骤的条件为20-25℃，30-50KHz超声10-30分钟；所述超声步骤的条件优选20-25℃，40KHz超声30分钟。所述含有非离子表面活性剂，氯己定和聚乙二醇的溶液中，非离子表面活性剂的浓度为0.10-0.20g/mL，优选0.20g/mL，聚乙二醇的浓度大于0.01g/mL，优选0.01g/mL。所述含有非离子表面活性剂、氯己定和聚乙二醇的溶液以缓冲溶液为溶剂配制，所述缓冲溶液为Tris-HCl缓冲溶液；所述缓冲溶液优选为pH为8.0、0.5mol/L的Tris-HCI缓冲液。

所述步骤2)中，所述钙盐溶液和磷酸盐溶液的添加，钙、磷元素摩尔比为1～2，优选1.3：1。