[发明专利]一种小鼠源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种小鼠源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：

包被ELISA酶标板的小鼠源性CD74抗体，为绵羊抗小鼠CD74抗体；

检测小鼠源性可溶型CD74的抗体，为大鼠抗小鼠CD74单克隆抗体；

酶标二抗，为辣根过氧化物酶标记的山羊抗大鼠IgG；

标准蛋白，为重组鼠CD74蛋白。

2.根据权利要求1所述的一种小鼠源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的绵羊抗小鼠CD74抗体为R&D Systems公司的AF7478，工作浓度为0.25ug/ml。

3.根据权利要求1所述的一种小鼠源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的大鼠抗小鼠CD74单克隆抗体为R&D Systems公司的MAB7478，工作浓度为1μg/ml。

4.根据权利要求1所述的一种小鼠源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的辣根过氧化物酶标记的山羊抗大鼠抗体为CellSignaling公司的#7077。

5.根据权利要求1所述的一种小鼠源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的重组鼠CD74蛋白为R&D Systems公司的7478-CD。

6.根据权利要求1至5任一所述的一种小鼠源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒，还包括：样品稀释液、包被缓冲液、封闭液、ELISA酶标板洗脱液、抗体稀释液、显色液，和终止液。

7.根据权利要求6所述的一种小鼠源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的样品稀释液：样品为血清或肺泡灌洗液时，样品稀释液为1×PBS，pH:7.4。

8.根据权利要求6所述的一种小鼠源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的封闭液，为Thermo公司的SuperBlock封闭缓冲液。

9.根据权利要求6所述的一种小鼠源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的包被缓冲液为1×PBS，pH:7.4；所述的ELISA酶标板洗脱液为含0.05％Tween-20的1×PBS溶液；所述的抗体稀释液为1×PBS，pH:7.4；所述的显色液为Thermo公司的TMB substrate kit；所述的终止液为2mol/L的硫酸溶液。

10.一种如权利要求1所述的小鼠源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

用CD74蛋白多克隆抗体包被ELISA酶标板，封闭液封闭后，分别加入标准重组鼠CD74蛋白和待测样品的稀释液，再加入CD74蛋白单克隆抗体，然后加酶标二抗，洗涤后加底物显色，用酶标仪在450nm波长下测定OD值，制的标准重组鼠CD74蛋白的标准曲线，通过标准曲线计算待测样品中可溶型CD74蛋白的浓度。

11.根据权利要求10所述的小鼠源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测方法，，其特征在于，该方法为：

包被缓冲液将AF7478稀释成0.25μg/ml，在ELISA酶标板的每孔中加入100μl，封板后置于4℃孵育过夜；用新鲜配置的ELISA酶标板洗脱液，每孔300μl，全自动洗板机Elx50洗涤3-5次，吸水纸上拍干；加入ELISA酶标板封闭液，每孔200μl，室温孵育2小时；同前法用ELISA酶标板洗脱液，每孔300μl，洗涤3-5次，拍干；放于4℃，备用；

血清样本或BALF样本，用样品稀释液以1:2稀释，以100μl/孔的体积加样，室温孵育2小时；同前法用ELISA酶标板洗脱液，每孔300μl，洗涤3-5次，拍干；将CD74抗体MAB7478稀释成1μg/ml，每孔100μl，室温孵育2小时；同前法用ELISA酶标板洗脱液，每孔300μl，洗涤3-5次，拍干；加入HRP标记的山羊抗大鼠IgG，每孔100μl，室温孵育1小时；同前法用ELISA酶标板洗脱液，每孔300μl，洗涤5-7次，拍干；加入底物四甲基联苯胺H2O2，每孔100μl，室温避光孵育10-15分钟，加入2mol/L硫酸溶液终止反应，每孔50μl；在酶标仪上450nm测定OD值。