[发明专利]一种小鼠源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫学和生物技术领域，具体涉及一种小鼠源性可溶型CD74蛋白的ELISA检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

CD74即主要组织相容性复合物Ⅱ类分子相关恒定链(major histocompatibility complex,MHC-Ⅱ-associated invariant chain,Ii)，是一种非多态性Ⅱ型跨膜糖蛋白，可分为膜内段、跨膜段及膜外段。CD74主要存在于细胞内，作为MHC-Ⅱ类分子的分子伴侣，促进内质网加工释放MHCⅡ类分子，转运至胞内体，阻止MHCⅡ类分子在内质网内与内源性多肽结合。此外，约2-5％的CD74表达于细胞表面，如B细胞系、上皮细胞、单核细胞等，且不依附于MHCⅡ类分子，其功能和MHC-Ⅱ类分子无关。近来研究发现CD74是巨噬细胞移动抑制因子(Macrophage Migration Inhibitory Factor,MIF)的高亲和力膜受体，与MIF结合可激活NF-κB、ERK1/2等信号转导途径，进而诱导炎性细胞因子的分泌。

已有研究证实胞内及胞膜上CD74参与了某些炎症性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤的发病过程。具有动脉硬化斑块形成倾向的Ldlr基因敲除小鼠，如同时缺失CD74基因，则动脉粥样硬化的程度减轻。研究发现动脉粥样硬化病人的斑块和外周血单核细胞中的CD74表达增高，且CD74的表达与血管内皮厚度相关，提示CD74可作为动脉粥样硬化的生物学诊断指标和治疗靶点。此外，MIF与肺泡巨噬细胞膜表面CD74作用，活化ERK1/2信号通路，诱导中性粒细胞在肺泡腔的聚集，抗-CD74抗体可阻断上述过程，提示CD74参与MIF介导的肺炎症反应。正常生理情况下，尿路上皮细胞膜表面不表达或少量表达CD74，不会参与MIF启动的信号通路。炎症条件下，神经递质P物质可上调尿路上皮细胞MIF和CD74的表达，参与膀胱炎症反应。在细胞因子IFN-γ的刺激下，胃粘膜上皮细胞表面CD74表达增加，伴随幽门螺旋杆菌量上升；使用抗CD74抗体或CD74水解酶后，附着细菌量则减少。研究发现幽门螺旋杆菌感染后两周，MIF和CD74的表达均增加，MIF通过结合CD74激活胞内信号途径NF-κB和ERK1/2，促进炎性细胞因子的产生，加快细胞增殖和抑制细胞凋亡，长期炎症刺激可演变成为慢性胃炎，形成胃溃疡，并最终引发胃的恶性病变。

就系统性红斑狼疮而言，两种具有狼疮倾向的小鼠品系，其循环血液中MIF水平的升高与疾病的发展和肾小球性血管炎的形成具有密切的时间依赖关系。同时，肾脏MIF，CD74，和CD44(CD74的协同分子)mRNA和蛋白的表达也随着炎症的发展显著升高。最近研究发现来源于系统性红斑狼疮小鼠的B细胞，其MIF和CD74的表达均明显增高，如激活这类B细胞的MIF/CD74通路，则可延长系统性红斑狼疮小鼠的存活时间。

近年多篇文献报道CD74和多种肿瘤的发生发展相关。如Ishinami等研究发现，CD74表达阴性的胃癌患者手术预后优于CD74表达阳性的患者；Nagata等发现CD74可作为预测胰腺癌的生物分子标志物。此外，CD74及其配体MIF也参与多种肿瘤的发生。MIF结合CD74，活化NF-γB，上调Tap63，分泌炎性因子IL-8，促进慢性淋巴细胞白血病细胞的存活。MIF与异位表达于人胚胎肾细胞293(HEK293)的CD74结合，激活ERK和PI3K/AKT信号通路，继而活化NF-γB，上调血管内皮细胞生长因子D，促进肿瘤的生长和转移。

CD74介导的信号通路不仅参与疾病的发生，也参与保护损伤的脏器。在肺炎症后期，MIF与CD74结合可诱导肺II型上皮细胞(AEC-Ⅱ)的增殖，促进肺泡上皮细胞的修复。MIF作用于CD74可激活心肌细胞单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(adenosine mono phosphate-activated protein kinase,AMPK)信号通路，促进葡萄糖的摄取，保护心肌细胞免受缺血再灌注损伤。Heinrichs等人发现MIF作用于CD74激活肝星状细胞内AMPK信号通路，抑制肝星状细胞增殖，具有抗纤维化作用。

上述研究表明CD74在炎症、自身免疫性疾病、肿瘤中发挥了重要的作用，可能成为这些疾病的生物标记物，亦可能成为相关疾病的疗效判定和预后指标。