[发明专利]人胰高血糖素样肽-1、抗体及其试剂盒

权利要求书

1.一种人源性GLP-1肽链，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一种人源性GLP-1肽链，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.一种人源性GLP-1肽链，其氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。

4.一种人源性GLP-1肽链，其氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。

5.一种单克隆抗体，其特征在于：能够识别权利要求1、2、3、或者4所述的多肽。

6.一种多克隆抗体，其特征在于：能够识别权利要求1、2、3、或者4所述的多肽，并由HRP标记。

7.如权利要求5所述的单克隆抗体，其特征在于：是由保藏号为CCTCC NO：

C2014108 的杂交瘤细胞株所分泌的。

8.一种杂交瘤细胞株，其保藏号为CCTCC NO ：C2014108。

9.一种试剂盒，其特征在于：含有权利要求1~4所述的多肽、或者权利要求5所述的单克隆抗体、或者权利要求6所述的多克隆抗体。

10.如权利要求9所述的一种试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒用于检测血清、或者血浆中的生物活性和失活的GLP-1总含量。

11.一种采用ELISA的方法测定血液或者血浆中GLP-1总含量的方法，其特征在于包括如下步骤：

1）一个制备反应板的步骤，在所述的制备反应板的步骤中，采用保藏号为CCTCC NO ：C2014108 的单克隆抗体作为包被抗体，用包被缓冲液作1:1000稀释，加于微孔板中，每孔100ul，置2~5℃冰箱中，20~50小时后取出，用蒸馏水冲洗2~6次，拍干，于微孔板中加入0.5% BSA-PBS，每孔100ul，置30~40℃水浴中1~3小时，取出，用蒸馏水冲洗2~6次，拍干；

2）一个配置标准液的步骤，先配置缓冲液，所述的缓冲液为0.5%BSA-0.05%Tween20 -PBS ，然后取合成肽抗原GLP-1(9-36)NH2，用缓冲液配，配制成74.5uM的溶液冷冻保存；

3）取上述GLP-1(9-36)融合蛋白74.5umol/L 用封闭液封闭，每孔100 ul，置30~40℃水浴中1~3小时，取出，用蒸馏水冲洗2~6次，拍干；

4）加入HRP-标记兔抗GLP-1抗体，用pH7.2，0.5% BSA-0.05% Tween 20-0.15molPBS作1:1500稀释，加于微孔板中，每孔100ul，置2~5℃冰箱中，20~50小时后取出，用蒸馏水冲洗2~6次，拍干；

5）加邻苯二胺底物显色，室温15分钟，用2mol硫酸终止显色；

6）使用主波长492nm，付波长640nm比色；

7）每个96孔酶标板均设0～2980nmol/L标准曲线和空白孔，以吸光度为横坐标，以浓度为纵坐标绘出标准曲线，以各待测样本的吸光度值在标准曲线上查出该样本GLP-1的浓度。