[发明专利]用于快速检测β-内酰胺酶耐药基因的多重PCR引物组

权利要求书

1.用于快速检测β-内酰胺酶耐药基因的多重PCR引物组，其特征在于，所述引物组由五对引物组成，分别用于检测β-内酰胺酶耐药基因blaTEM、blaSHV、blaOXA、blaCTX-M-1和blaCTX-M-9，其中，用于β-内酰胺酶耐药基因blaTEM检测的引物序列为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，用于β-内酰胺酶耐药基因blaSHV检测的引物序列为SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示，用于β-内酰胺酶耐药基因blaOXA检测的引物序列为SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示，用于β-内酰胺酶耐药基因blaCTX-M-1检测的引物序列为SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示，用于β-内酰胺酶耐药基因blaCTX-M-9检测的引物序列为SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示。

2.如权利要求1所述的多重PCR引物组，其特征在于，用于检测β-内酰胺酶耐药基因blaTEM、blaSHV、blaOXA、blaCTX-M-1和blaCTX-M-9时，包括以下步骤：

(1)DNA模板提取:

采用DNA提取试剂盒和核酸提取仪提取和纯化临床分离的肠杆菌科菌株的总DNA；

(2)采用多重PCR扩增检测β-内酰胺酶耐药基因blaTEM、blaSHV、blaOXA、blaCTX-M-1和blaCTX-M-9，反应体系如下：

反应体系，总体系20μL

(3)多重PCR反应循环参数如下：

预变性：94℃，5～10min；变性：94℃，30-60s；退火：61℃，30-60s；延伸：72℃，1～2min，连续30～40个循环；最终延伸：72℃，5～10min；

(4)耐药基因检测结果鉴定：

取4μL PCR产物通过2％的琼脂糖凝胶电泳，100V～120V电压电泳45～60min，溴化乙锭浸润染色凝胶5min后，在紫外光下观察，DNA大小标记采用100bp间隔的DNA分子量标记进行比对，802bp、758bp、564bp、665bp、518bp的条带，分别指示blaTEM、blaSHV、blaOXA、blaCTX-M-1和blaCTX-M-9基因。

3.根据权利要求2所述的多重PCR引物组，其特征在于，步骤(3)中所述的多重PCR反应循环参数为：预变性：94℃，10min；变性：94℃，45s；退火：61℃，45s；延伸：72℃，1min，连续30个循环；最终延伸：72℃，10min。

4.根据权利要求2所述的多重PCR引物组，其特征在于，步骤(4)中所述的琼脂糖凝胶电泳的条件为：取4μL PCR产物通过2％的琼脂糖凝胶电泳，120V电压电泳45min，溴化乙锭浸润染色凝胶5min后，在紫外光下观察。

5.权利要求1-4任一项所述的多重PCR引物组在制备检测β-内酰胺酶耐药基因的试剂中的应用，其中，所述β-内酰胺酶耐药基因包括blaTEM、blaSHV、blaOXA、blaCTX-M-1和blaCTX-M-9。

6.一种用于快速检测β-内酰胺酶耐药基因的多重PCR检测试剂盒，其特征在于含有权利要求1-4任一项所述的多重PCR引物组。