[发明专利]用于快速检测β-内酰胺酶耐药基因的多重PCR引物组

说明书

技术领域

本发明涉及快速检测β-内酰胺酶耐药基因的多重PCR引物，特别涉及用于快速检测β-内酰胺酶耐药基因blaTEM、blaSHV、blaOXA、blaCTX-M-1和blaCTX-M-9的多重PCR引物组，本发明属于医学分子生物学领域。

背景技术

β-内酰胺类抗生素是指化学结构中具有β-内酰胺环的一大类抗生素，包括青霉素、头孢菌素、头霉素、单环β-内酰胺类、β-内酰胺酶阻滞剂以及碳青霉烯类抗生素。各种β-内酰胺类抗生素的作用机制均相似，都能抑制胞壁粘肽合成酶，从而阻碍细胞壁粘肽合成，使细菌胞壁缺损，菌体膨胀裂解。β-内酰胺类抗生素是目前临床抗感染治疗最普遍应用的一类抗生素，随着这类抗生素的广泛使用和致病菌的变迁，产生了细菌对这类抗生素的耐药性问题，而且耐药发生率相当高。细菌产生超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-Lactamase，ESBLs)是80％细菌耐药的原因之一。β-内酰胺酶是指能催化水解6-氨基青霉烷酸(6-APA)和7-氨基头孢烷酸(7-ACA)及其N-酰基衍生物分子中β-内酰胺环酰胺键的灭活酶，自20世纪80年代初，ESBLs持续地在肠杆菌科感染特别是那些由大肠杆菌和肺炎克雷伯菌引起的复杂治疗中发现，它们也可由非发酵的革兰氏阴性菌产生，如鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌。在中国几个中心的过去研究报告称，ESBL在肺炎克雷伯菌中的流行率为20％-40％。细菌产生β-内酰胺酶是细菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制。β-内酰胺酶是细菌产生的可水解β-内酰胺类抗生素的酶，Ambler等根据β-内酰胺酶分子结构中氨基酸序列差异，将β-内酰胺酶分成A、B、C和D四种类型。1995年Bush等提出了β-内酰胺酶的功能分类方案，依据酶的底物和酶被抑制不同，将其分为4群，其中2和3群又分为许多亚群，这其中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)可以水解除头霉素类(头孢西丁和头孢替坦)以外的多数青霉素、第三与第四代头孢菌素和氨曲南等抗生素，属于Ambler分类的A类，按Bush分类属2be群。目前，ESBLs可分为TEM族、SHV族、CTX-M族、OXA族及一些不属于上述任何一个家族的类型，其中以TEM族和SHV族种类最多。产ESBLs的细菌呈世界性分布，但不同地区流行的ESBLs基因型不同。如：美国主要流行TEM、SHV型ESBLs；阿根廷以CTX-M型ESBLs为主；西班牙主要流行CTX-M-10，其次是SHV-2和TEM-4；希腊以SHV-5为主，其次为CTX-M型的ESBLs；日本流行Toho-1和SHV-12；我国主要流行TEM、SHV、OXA和CTX-M型ESBLs，在过去30年中，ESBL亚型和变种在社区和医院的种量的上升不仅使我们担心，急需我们建立一种能在单次实验中检测多种ESBL的基因型的方法，这种方法对临床和流行病学上检测ESBLs是非常有用的，本发明在以上研究的基础上，建立了快速检测β-内酰胺酶耐药基因blaTEM、blaSHV、blaOXA、blaCTX-M-1和blaCTX-M-9。