[发明专利]一种丁内酯类木脂素类化合物及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种丁内酯类木脂素类化合物，其特征在于所述丁内酯类木脂素化合物是以青霉属分枝青霉组(P.ramigena，YNCA0361)菌株经发酵、提取、层析、纯化后得到，具有2-羰基-丙基片段，分子式为C₂₃H₂₂O₈，具有下述结构：

命名为青霉内酯A，英文名为versicolactone A； 

所述青霉属分枝青霉组(P.ramigena，YNCA0361)菌株，菌株保藏编号为CGMCC No. 4824，保藏日期为2011年5月2日。

2.一种权利要求1所述的丁内酯类木脂素类化合物的制备方法，其特征在于是以青霉属分枝青霉组 (P.ramigena，YNCA0361) 菌株的固体发酵物为原料，经有机溶剂提取、硅胶柱层析、MCI柱脱色、反相柱层析、高压液相色谱分离步骤而得到，具体为：

A、固体发酵：将菌株在马铃薯葡萄糖琼脂培养基中于20~30℃下培养7天，接种到含10~100毫升马铃薯葡萄糖培养基的50~500毫升的三角瓶中，于 28℃下在转速180 rpm下震荡培养5~10天，含菌营养基，将其接种进行大规模固体发酵得到发酵产物；

B、发酵物浸膏提取：将发酵产物中加入固液体积比1.5 ~ 3倍的有机溶剂冷浸提取2~4次，每次30 ~ 60 min，合并提取液，过滤，减压浓缩至1/4~1/2体积时，静置，滤除沉淀物，浓缩得到浸膏；

C、硅胶柱层析：浸膏用重量比1.5~3倍量的丙酮溶解，用浸膏重量比0.8~1.2倍的80~100目硅胶拌样，然后上硅胶柱层析，装柱硅胶为200~300目，用量为浸膏重量6~8倍量；用体积比为1:0~6:4的混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；

D、MCI脱色：将C步骤所得的各部分分别用重量比1.5~3倍量的体积浓度85~100%甲醇水溶液溶解，上柱前用水或者体积浓度浓度低于10%的甲醇平衡好的MCI柱，用体积浓度为85~100%的甲醇水溶液进行洗脱脱色，分别收集以体积比为1:0~6:4的混合有机溶剂梯度洗脱对应的梯度洗脱液、浓缩；

E、反相柱层析： 将经C步骤以体积比为1:0~6:4的混合有机溶剂梯度洗脱后经D步骤MCI脱色的20:1部分上反相柱层析，反相柱用反相材料C-18装柱；用体积含量为20~100%的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；

F、高效液相色谱分离：将E步骤以体积含量50~70%甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液经高效液相色谱分离纯化，即得所述的丁内酯类木脂素，青霉内酯A。

3.根据权利要求2所述的丁内酯类木脂素类化合物的制备方法，其特征在于A步骤中所述的大规模固体发酵是将所得的含菌营养基接种100~1000个100~500毫升的冯巴赫瓶中，每个瓶含有10~200克大米和10~200毫升蒸馏水，每个瓶中接种1.0~5.0毫升，于25℃下培养20~45天。

4.根据权利要求2所述的丁内酯类木脂素类化合物的制备方法，其特征在于B步骤中所述的有机溶剂为70~100%的丙酮、乙醇、乙酸乙酯或甲醇。

5.根据权利要求2所述的丁内酯类木脂素类化合物的制备方法，其特征在于C步骤中所述的混合有机溶剂为正己烷-丙酮、氯仿-丙酮、氯仿-甲醇、石油醚-丙酮或石油醚-乙酸乙酯。

6.根据权利要求2或5所述的丁内酯类木脂素类化合物的制备方法，其特征在于所述的混合有机溶剂的体积配比为1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2和0:1。

7.根据权利要求2所述的丁内酯类木脂素类化合物的制备方法，其特征在于D步骤中所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙酸乙酯、氯仿、石油醚、石油醚或苯。

8.根据权利要求2所述的丁内酯类木脂素类化合物的制备方法，其特征在于E步骤中所述的甲醇水溶液的浓度为20%、30%、40%、50%、60%、70%和100%。