[发明专利]一种丁内酯类木脂素类化合物及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物发酵的次生代谢产物分离纯化技术领域，具体涉及一种新颖的具有2-羰基-丙基片段的丁内酯类木脂素类化合物及其制备方法和应用。

背景技术

微生物代谢产物的种类很多，在菌体对数生长期所产生的产物，如氨基酸、核苷酸、蛋白质、核酸、糖类等，是菌体生长繁殖所必需的。这些产物叫做初级代谢产物；在菌体生长静止期，某些菌体能合成一些具有特定功能的产物，如抗生素、生物碱、细菌毒素、植物生长因子等。这些产物与菌体生长繁殖无明显关系，叫做次生代谢产物。次生代谢产物多为小分子化合物，但其化学结构类型多种多样，不同结构的次生代谢产物广泛具有抗炎症、抗菌、抗病毒、抗癌、扩张心血管、强心、平喘等多种生理活性，因而从微生物次生代谢中发现具有药用价值的先导性化合物得到了广泛的关注，并且药物生产已成为发酵工业的重要支柱。

丁内酯类木脂素是一类具有四个碳原子和一个氧原子组成的五元内酯为特征的木脂素类化合物，通常该类化合物都有一个或者两个异戊烯基取代基。该类化合物由于其较强的生物活性，如抗菌、抗肿瘤、抗炎和抗病毒等，而引起了人们的关注，是一类重要的药用成分。本发明从青霉属分枝青霉组固体发酵产物中分离得到一种具有显著抗烟草花叶病毒活性的丁内酯类木脂素；该化合物至今尚未见到相关报道。

发明内容

本发明的第一目的是提供一种丁内酯类木脂素类化合物；第二目的在于提供所述的丁内酯类木脂素类化合物的制备方法；第三目的在于提供所述的木脂素在制备抗烟草花叶病毒中的应用。

本发明的第一目的是这样实现的，所述丁内酯类木脂素化合物是以青霉属分枝青霉组(P.ramigena，YNCA0361)菌株经发酵、提取、层析、纯化后得到，具有2-羰基-丙基片段，分子式为C₂₃H₂₂O₈，，具有下述结构：

命名为青霉内酯A，英文名为versicolactone A； 

所述青霉属分枝青霉组(P.ramigena，YNCA0361)菌株，菌株保藏编号为CGMCC No. 4824，保藏日期为2011年5月2日。

本发明的第二目的是这样实现的，所是以青霉属分枝青霉组(P.ramigena，YNCA0361)菌株的固体发酵物为原料，经有机溶剂提取、硅胶柱层析、MCI柱脱色、反相柱层析、高压液相色谱分离步骤而得到，具体为：

A、固体发酵：将菌株在马铃薯葡萄糖琼脂培养基中于20℃~30℃下培养7天，接种到含10~100毫升马铃薯葡萄糖培养基的50~500毫升的三角瓶中，于 28℃下在转速180 rpm下震荡培养5~10天，含菌营养基，将其接种进行大规模固体发酵得到发酵产物；

B、发酵物浸膏提取：将发酵产物中加入固液体积比1.5~3倍的有机溶剂冷浸提取2~4次，每次30~60min，合并提取液，过滤，减压浓缩至1/4~1/2体积时，静置，滤除沉淀物，浓缩得到浸膏；

C、硅胶柱层析：浸膏用重量比1.5~3倍量的丙酮溶解，用浸膏重量比0.8~1.2倍的80~100目硅胶拌样，然后上硅胶柱层析，装柱硅胶为200~300目，用量为浸膏重量6~8倍量；用体积比为1:0~6:4的混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；

D、MCI脱色：将C步骤所得的各部分分别用重量比1.5~3倍量的体积浓度85~100%甲醇水溶液溶解，上柱前用水或者体积浓度10%的甲醇平衡好的MCI柱，然后上柱，用体积浓度为85~100%的甲醇水溶液进行洗脱脱色，分别收集以体积比为1:0~6:4的混合有机溶剂梯度洗脱对应的梯度洗脱液、浓缩；

E、反相柱层析： 将经C步骤以体积比为1:0~6:4的混合有机溶剂梯度洗脱后经D步骤MCI脱色的20:1部分上反相柱层析，反相柱用反相材料C-18装柱；用体积含量为20~100%的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；

F、高效液相色谱分离：将E步骤以体积含量50~70%甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液经高效液相色谱分离纯化，即得所述的丁内酯类木脂素，青霉内酯A。

以上述方法制备的丁内酯类木脂素类化合物的结构是通过以下方法测定出来的：

本发明所述的丁内酯类木脂素类化合物为淡黄色或者白色晶体，通过一维和二维核磁共振谱、高分辨质谱、以及紫外和红外等谱学数据，最终确定青霉内酯A的结构。