[发明专利]流式细胞术方法在疫苗生产实时监测中的应用

权利要求书

1.流式细胞术方法在疫苗生产实时监测中的应用，其特征在于：是将流式细胞术方法应用于疫苗生产过程中，检测疫苗生产过程中的活菌数；

所述的疫苗包括大肠杆菌疫苗、葡萄球菌疫苗、猪丹毒疫苗、链球菌疫苗、沙门氏菌疫苗、魏氏梭菌疫苗、鸡毒支原体疫苗、多杀性巴氏杆菌疫苗和副猪嗜血杆菌疫苗。

2.根据权利要求1所述流式细胞术方法在疫苗生产实时监测中的应用，其特征在于包含如下步骤：

(1)选择如下所述的荧光染料中的至少两种着染目标菌；荧光染料为对活菌细胞能进行染色的染料、对总菌数能进行染色的染料和对死菌细胞能进行染色的染料；

(2)然后用流式细胞仪检测细菌荧光信号的变化，通过测定细菌荧光信息的变化，得到FCM图谱；FCM图谱具有如下参数中的至少两种：活菌数、死菌数和总菌数；依据FCM图谱得到活菌数的比例；

(3)通过绝对计数法得到目标菌菌液的浓度；

(4)依据步骤(2)得到的活菌数的比例和步骤(3)得到的目标菌菌液的浓度，得到目标菌的活菌量和死菌量。

3.根据权利要求2所述流式细胞术方法在疫苗生产实时监测中的应用，其特征在于：步骤(1)为：选择如下所述的荧光染料着染目标菌；荧光染料为对活菌细胞能进行染色的染料和对总菌数能进行染色的染料中的一种与对死菌细胞能进行染色的染料形成的组合。

4.根据权利要求2或3所述流式细胞术方法在疫苗生产实时监测中的应用，其特征在于：

步骤(1)中所述的对活菌细胞能进行染色的染料为CFDA-SE；；

步骤(1)中所述的对总菌数能进行染色的染料为SYBR Green I；

步骤(1)中所述的对死菌细胞能进行染色的染料为PI。

5.根据权利要求2所述流式细胞术方法在疫苗生产实时监测中的应用，其特征在于：步骤(3)中所述通过绝对计数法得到目标菌菌液的浓度通过血球计数板计数或通过流式细胞仪计数。

6.根据权利要求5所述流式细胞术方法在疫苗生产实时监测中的应用，其特征在于：所述的通过流式细胞仪计数为通过如下步骤实现：将已知浓度的磁珠和所述的目标菌菌液混合，通过流式细胞仪检测，通过如下公式计算得到目标菌菌液的浓度；

公式为：

(菌细胞数/磁珠数)*(每管内总磁珠数/样品总体积)*稀释倍数＝菌液浓度；

菌细胞数指一定时间内流式细胞仪检测到的菌细胞数；磁珠数指一定时间内流式细胞仪检测到的磁珠数；每管内总磁珠数指样品检测管内的磁珠总数；稀释倍数指菌液的稀释倍数。