[发明专利]一种动物产品中氯霉素检测的前处理方法

说明书

技术领域

本发明属于食品安全技术领域，具体涉及一种动物产品中氯霉素检测的前处理方法。

背景技术

氯霉素是一种高效广谱的抗生素，在各种动物传染性疾病的防治方面得到了广泛的应用，由于氯霉素有严重的毒副作用，长期微量摄入氯霉素不仅会使大肠杆菌、沙门氏菌等多种菌株产生耐药性，而且会引起动物机体正常菌群失调、抵抗力降低、易感染各种疾病。氯霉素在食用动物中的残留，可通过食物链在人体中富集，因此对人类的健康构成了潜在危害。许多国家和地区已经相继禁止或严格限制使用氯霉素，1999年9月13日，我国农业部发布了《动物性食品中兽药最高残留限量》的通知，规定了氯霉素在所有食品动物的可食用组织中不得检出。但由于氯霉素抑菌效果好，价格低廉，目前违法使用的现象时有发生。因此，建立高灵敏度、特异性强、简便易行而又经济的氯霉素残留的分析方法已经成为一项迫切的任务。

现有检测动物产品中氯霉素含量的方法包括氯霉素检测方法包括微生物法、色谱法、免疫测定法。微生物法易操作，费用低，但灵敏度低，特异性差；免疫测定具有灵敏度高、特异性强、对仪器设备和人员素质要求低以及样品前处理简单等优点，适于现场监控和大规模样品筛选，但其影响因素较多，易出现假阳性结果，抗体批次不同，测定结果也会出现差异等；色谱法精确可靠、灵敏度高，检测极限可达到0.1μgPkg，但前处理步骤多，回收率偏低，所以急需一种操作成本低，具备高重现性、高准确性、高灵敏度的前处理方法。

发明内容

本发明前处理方法包括待测样品的称量、提取、回旋振荡、离心、净化、衍生化等操作；所用仪器包括离心机、振荡器、恒温干燥箱和氮吹仪等；用本前处理方法制备出的样品溶液可以直接用气相色谱－质谱法进行检测。该前处理方法与现有方法相比，具有操作成本低、高重现性、高准确性、高灵敏度等优点，具有很强的可操作性，有望在农业、质检部门及出入境检验检疫等行业大规模推广应用，具有显著的经济效益。本发明可以准确检测到肉类中是否含有氯霉素，经检测后的动物产品食用是安全的，并符合我国国家标准的要求。

为实现上述目的，本发明提供一种动物产品中氯霉素检测的前处理方法，由以下步骤组成：

(1)提取；称取3～8g匀浆后的肉类或蛋类置于100mL离心管中，加入15～25mL乙酸乙酯，均质0.5～1.5min，回旋振荡15～25min，2500～3500r/min离心3～8min；取上清液转入另一100mL离心管中，试样中再用10～20mL乙酸乙酯，再提取一次，合并上清液，氮气吹干；

(2)净化；加入0.5～1.5mL甲醇超声溶解残渣，依次加入15～25mL质量分数为3％～8％氯化钠和5～15mL正己烷；回旋振荡5～15min，弃去正己烷层；再加入10～20mL乙酸乙酯，回旋振荡5～15min，静置分层，吸取上层转入15mL具塞离心管中，氮气吹至0.5～1.5mL；

(3)衍生化；将上述液体移入5mL具塞离心管中，用1～3mL乙酸乙酯洗原离心管，合并乙酸乙酯溶液，用50℃～60℃氮气蒸发至干；向残余物中依次加入90～110μL正己烷，90～110μL硅烷化试剂，混匀20～40s，于恒温干燥箱中110℃～130℃反应20～40min，氮气吹干；加入0.3～0.6mL甲苯溶解，用0.25μm微孔滤膜过滤，所得滤液即为待测液。

所述步骤(1)进一步优选为称取5.0g匀浆后的肉类或蛋类置于100mL离心管中，加入20mL乙酸乙酯，均质1min，回旋振荡20min，3000r/min离心5min；取上清液转入另一100mL离心管中，试样中再用15mL乙酸乙酯，再提取一次，合并上清液，氮气吹干。

所述步骤((2)进一步优选为加入1mL甲醇超声溶解残渣，依次加入20mL 5％氯化钠和10mL正己烷；回旋振荡10min。弃去正己烷层；再加入15mL乙酸乙酯，回旋振荡10min，静置分层，吸取上层转入15mL具塞离心管中，氮气吹至1mL。

所述步骤(3)进一步优选为将上述液体移入5mL具塞离心管中，用2mL乙酸乙酯洗原离心管，合并乙酸乙酯溶液，用55℃氮气蒸发至干；向残余物中依次加入100μL正己烷，100μL硅烷化试剂，混匀30s，于恒温干燥箱中120℃反应30min，氮气吹干；加入0.50mL甲苯溶解，用0.25μm微孔滤膜过滤，所得滤液即为待测液。

本发明具有定量准确、灵敏度高、检出限低、操作简单、分析时间短、适用范围广等优点，能够满足国内食品安全的标准和出口有关要求，与现有技术相比，具有如下特点：