[发明专利]利用葡串细基格交配性基因诱导异旋孢腔菌突变菌株恢复有性生殖的方法

说明书

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及一种使异旋孢腔菌突变菌株C4-41.7恢复有性生殖的方法。

背景技术

真菌的生活史主要包含无性阶段和有性阶段，无性生殖不需要核配与减数分裂，体细胞直接以断裂、裂殖或芽殖方式产生无性孢子。有性生殖则需要性细胞或性器官结合，经过核配与减数分裂产生各种类型的有性孢子。无性生殖生长周期短，保留了母本的优良性状且物种数量迅速增加，在稳定环境条件下，具突出的优越性。但在恶劣生境下，有性生殖处于优势地位。有性生殖两性亲本分别传递一半的遗传信息，可以进行基因重组与遗传变异，利于优良基因快速传播，使不良基因逐渐消退，由此增强了生物对不良环境的适应性。真菌性别分化及有性进化是自然选择的结果，在适应性选择进化过程中，有性生殖受遗传因子和环境因子的协同调控。

细基格孢属是暗色丝孢真菌中的一个重要类群，由Preuss于1846年提出，1851年以葡串细基格孢(U.botrytis)为模式种正式建立。该属的几个近似属(链格孢属Alternaria Nees、匍柄霉属Stemphylium Wallr、埃里砖格孢属Embellisia E.G.Simmons 及假格孢属Nimbya E.G.Simmons)均已经发现了有性态，然而迄今为止，细基格孢属的有性态尚未发现。因此，对该属真菌的分类描述仅限于无性特征，如分生孢子的形态、大小、纵横隔膜数、长宽比及孢壁结构等，有时难免会出现属间分类标准的重叠，致使细基格孢属的界定长期存在分歧。细基格孢属许多种的分类地位常游移于匍柄霉属和链格孢属之间，造成错误鉴定或同物异名。二十世纪中叶，Simmons(1967)对该属进行了系统研究，较全面地阐述了细基格孢属真菌的分类特征，对一些分类单位进行了认真的订正，对Preuss有关细基格孢属的观点给予支持和认可。在对大量的模式标本和代表性培养物认真观察和描述的基础上，对本属的合法分类地位给予肯定。

目前，对细基格孢属的分类及系统学研究较为成熟，通过形态学与分子系统学结合的方法发现了大量新的物种，丰富了细基格孢属物种资源并积累了大量基因信息。然而涉及本属有性进化研究的资料基本没有，因此相关方面研究有待开展。

发明内容

本发明的目的是提供一种使异旋孢腔菌突变菌株C4-41.7恢复有性生殖的方法。

本发明所提供的使异旋孢腔菌突变菌株C4-41.7恢复有性生殖的方法，可为如下(A)或(B)：

(A)可包括如下步骤：将葡串细基格孢的两个交配型基因同时导入异旋孢腔菌突变菌株C4-41.7，得到重组菌株；将所述重组菌株自交即可产生有性世代；

(B)可包括如下步骤：将葡串细基格孢的两个交配型基因分别导入异旋孢腔菌突变菌株C4-41.7，得到重组菌株1和重组菌株2；将所述重组菌株1和所述重组菌株2杂交即可产生有性世代。

将所述葡串细基格孢的两个交配型基因分别记为MAT1-1-1基因和MAT1-2-1基因；所述MAT1-1-1基因编码的蛋白质的氨基酸序列具体为序列表中序列1；所述MAT1-2-1基因编码的蛋白质的氨基酸序列具体为序列表中序列2。

进一步，所述MAT1-1-1基因的序列为序列表中序列3或序列5；所述MAT1-2-1基因的序列为序列表中序列4或序列6。

其中，序列3是葡串细基格孢MAT1-1-1基因的基因组序列，由1217个核苷酸组成，其中第248-294位为内含子序列；序列5是葡串细基格孢MAT1-1-1基因的cDNA序列，由1170个核苷酸组成。序列3和序列5均编码序列表中序列1所示的蛋白质。序列4葡串细基格孢MAT1-2-1基因的基因组序列，由1083个核苷酸组成，其中第482-535位为内含子序列；序列6是葡串细基格孢MAT1-2-1基因的cDNA序列，由1029个核苷酸组成。序列4和序列6均编码序列表中序列2所示的蛋白质。

在所述(A)方法中，所述MAT1-1-1基因和所述MAT1-2-1基因是通过同一个重组表达载体A导入所述异旋孢腔菌突变菌株C4-41.7的；

在所述(B)方法中，所述MAT1-1-1基因是通过重组表达载体B1导入所述异旋孢腔菌突变菌株C4-41.7的；所述MAT1-2-1基因是通过重组表达载体B2导入所述异旋孢腔菌突变菌株C4-41.7的。

进一步，所述重组表达载体A中启动所述MAT1-1-1基因和所述MAT1-2-1基因共同转录的启动子为GPD1启动子；