[发明专利]南芥菜花叶病毒SYBR Green I实时荧光RT-PCR检测试剂盒及方法

权利要求书

1.用于检测南芥菜花叶病毒的引物组，由一条反转录引物和两条扩增引物组成；所述反转录引物为序列表中序列1所示的单链DNA；所述两条扩增引物为序列表中序列2和序列3所示的两条单链DNA。

2.用于检测南芥菜花叶病毒的引物对，为由序列表中序列2和序列3所示的两条单链DNA组成的引物对。

3.用于检测南芥菜花叶病毒的试剂，包括权利要求1所述的引物组或权利要求2所述的引物对，以及如下中的至少一种：dNTPs、Mg²⁺、DNA聚合酶、反转录酶、RNA酶抑制剂和SYBR Green I。

4.用于检测南芥菜花叶病毒的试剂盒，含有权利要求1所述的引物组或权利要求2所述的引物对或权利要求3所述的试剂，以及作为阳性对照的南芥菜花叶病毒的病叶冻干粉末或携带有南芥菜花叶病毒基因组片段的质粒；和/或作为阴性对照的水。

5.权利要求1所述的引物组或权利要求2所述的引物对或权利要求3所述的试剂或权利要求4所述的试剂盒在检测待测样品中是否含有南芥菜花叶病毒中的应用。

6.一种检测或辅助检测待测样品中是否含有南芥菜花叶病毒的方法，包括如下步骤：

(1)从所述待测样品中提取总RNA，采用权利要求1中所述的反转录引物进行反转录反应，得到待测cDNA；

(2)以所述待测cDNA作为模板，用权利要求1中所述的两条扩增引物进行实时荧光定量PCR反应；

(3)反应结束后，根据扩增曲线和熔解曲线按照如下方法确定所述待测样品中是否含有南芥菜花叶病毒：若所述待测样品产生S型扩增曲线，且熔解温度为81～84℃，则所述待测样品中含有或候选含有南芥菜花叶病毒；反之，则所述待测样品中不含有或候选不含有南芥菜花叶病毒。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，用所述两条扩增引物进行PCR反应时，所述两条扩增引物的摩尔比为1﹕1；和/或步骤(2)中，所述实时荧光定量PCR反应的退火温度为50℃。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述进行反转录反应的温度为37℃。

9.权利要求1所述引物组的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括将权利要求1所述引物组中的三条单链DNA分别单独包装的步骤；或

权利要求2所述引物对的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括将权利要求2所述引物对中的两条单链DNA分别单独包装的步骤。

10.权利要求1所述引物组或权利要求2所述的引物对在制备权利要求3所述试剂或权利要求4所述试剂盒中的应用。