[发明专利]南芥菜花叶病毒SYBR Green I实时荧光RT-PCR检测试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明属于植物检疫技术领域，涉及一种南芥菜花叶病毒SYBR Green I实时荧光RT-PCR检测试剂盒及方法，特别涉及用于检测南芥菜花叶病毒的SYBR Green I实时荧光RT-PCR引物组、试剂盒及其检测方法。

背景技术

南芥菜花叶病毒(Arabis mosaic virus,ArMV)属于类小RNA病毒目(Picornavirales)、伴生豇豆病毒科(Secoviridae)、线虫传多面体病毒属(Nepovirus)中的一个病毒成员，是农业生产上一种重要的植物病毒，已被我国列为禁止进境的检疫性有害生物。ArMV主要通过汁液摩擦传播，也可以通过种子、块茎、鳞球茎、苗木等种苗传播，还可以通过介体线虫传播。该病毒寄主范围非常广，可侵染170多个属200多种植物，主要危害黄瓜(Cucumis sativus)、西葫芦(Cucurbita pepo)、莴苣(Lactuca sativa)、芹菜(Apium graveolens)、番茄(Lycopericon esculentum)、菜豆(Phaseolus vulgaris)、豇豆(Vigna unguiculata)、蚕豆(Vicia faba)、豌豆(Pisum scatwum)、甜瓜(Cucumis melo)、花椰菜(Brassica oleracea L.var.botrytis)、菠菜(Spinacia oleracea)、胡萝卜(Daucus carota)、大豆(Glycine max)、甜菜(Beta vulgaris)、马铃薯(Solanum tuberosm)、大麻(Cannabis sativa)、啤酒花(Humulus lupulus)、草莓(Fragaia ananassa)、葡萄(Vitis vinifera)、香石竹(Dianthus caryophyllus)、水仙(Narcissus tazetta)、蔷薇(Rosa multiflora)、草木樨(Melilotus suaveolens)、郁金香(Tulipa gesneriana)、薄荷(Mentha sppiperita)、丁香(Syringa oblata)、烟草(Nicotiana tabacum)等多种作物。引起的最常见症状是叶片斑驳和脱落、植株矮化、严重畸型、耳突，但会随着寄主植物、病毒的分离物、栽培条件、季节和年份的不同而不同。有时候也可能产生隐症，并不会在寄主植物上表现症状。

基于PCR技术的分子检测方法，已越来越多应用于植物病毒的检测中。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种可用于检测南芥菜花叶病毒的引物组或引物对，是SYBR Green I实时荧光定量PCR检测的引物组或引物对。

本发明所提供的用于检测南芥菜花叶病毒的引物组，具体由一条反转录引物和两条扩增引物组成；所述反转录引物为序列表中序列1所示的单链DNA；所述两条扩增引物为序列表中序列2和序列3所示的两条单链DNA。

本发明所提供的用于检测南芥菜花叶病毒的引物对，具体为由序列表中序列2和序列3所示的两条单链DNA组成的引物对。

其中，序列1由18个核苷酸组成；序列2由20个核苷酸组成；序列3由20个核苷酸组成。

在所述引物组中，既可以“各引物分别单独包装”，也可以“将所述反转录引物单独包装于包装A中，将所述两条扩增引物一同包装于包装B中”。如果是前者，可为各引物的配比可为任意比，如20:6:6。如果是后者，所述包装B中，所述两条扩增引物的摩尔比为1:1。

在所述引物对中，既可以各引物分别单独包装，也可以混合包装。如果是前者，可为各引物的配比可为任意比，如1:1。如果是后者，所述两条扩增引物的摩尔比为1:1。

本发明的第二个目的是提供用于检测南芥菜花叶病毒的试剂。

本发明所提供的用于检测南芥菜花叶病毒的试剂，具体可包括所述引物组，以及如下中的至少一种：dNTPs、Mg²⁺、Taq DNA聚合酶、反转录酶、RNA酶抑制剂和SYBR Green I。

在所述试剂中，各物质可分别单独包装。

在本发明中，所述DNA聚合酶具体为Taq DNA聚合酶；所述反转录酶具体为M-MLV反转录酶。

本发明的第三个目的是提供一种用于检测南芥菜花叶病毒的试剂盒。