[发明专利]一种用海藻酸钙-壳聚糖固定磷脂酶A2的方法

权利要求书

1.一种用海藻酸钙-壳聚糖固定磷脂酶A2的方法，其特征在于用海藻酸钙-壳聚糖复合载体固定脂质酰基转移酶通过以下步骤实现：

步骤一：在40℃水浴中分别保温溶解浓度为0.1%~5.0%的海藻酸钙，同时称取一定量的壳聚糖在5%的醋酸溶液于40℃水浴中保温溶解，再向完全溶解的壳聚糖醋酸溶液中加入一定量的CaCl₂溶液，充分混匀，用移液枪准确移取1ml稀释10倍的酶液于一定浓度的10mL海藻酸钙溶液中，搅拌均匀；静止一段时间后，用灭菌后的10mL注射器吸入上述混合液，以约5滴/s注入一定浓度的10mL壳聚糖醋酸溶液、CaCl₂混合溶液中，以转速180r/min搅拌，形成光滑的微胶囊球，再加入一定浓度戊二醛，同时快速搅拌，将其置于4℃环境固定化一定时间；将微胶囊以pH8.0 NaHCO₃、0.1mo1/L NaCl、0.lmol/L pH5.5 NaAc、pH8.0 Tris-HCl顺序洗涤后，然后进行冷冻干燥，制得的固定化酶进行酶活力测定分析，确定海藻酸钙浓度；

步骤二：选择壳聚糖浓度分别为0.1%~5.0%，过程同步骤一，确定壳聚糖浓度；

步骤三：选择氯化钙浓度分别为0.1mol/L~1.0 mol/L，过程同步骤一，确定氯化钙浓度；

步骤四：选择戊二醛浓度分别为0.1% ~1.0%，过程同步骤一，确定戊二醛浓度；

步骤五：选择交联时间分别为2h~10h，过程同步骤一，确定交联时间。

2.根据权利要求1所述的一种用海藻酸钙-壳聚糖固定化脂质酰基转移酶的方法，其特征在于步骤一中将浓度为1.5%~2.5%的海藻酸钙在40℃水浴中保温溶解。

3.根据权利要求1所述的一种用海藻酸钙-壳聚糖固定化脂质酰基转移酶的方法，其特征在于步骤二中将浓度为1.5%~2.5%的壳聚糖在5%的醋酸溶液于40℃水浴中保温溶解。

4.根据权利要求1所述的一种用海藻酸钙-壳聚糖固定化脂质酰基转移酶的方法，其特征在于步骤三中向完全溶解的壳聚糖醋酸溶液中加入浓度为0.1mol/L~0.3mol/L的CaCl₂溶液。

5.根据权利要求1所述的一种用海藻酸钙-壳聚糖固定化脂质酰基转移酶的方法，其特征在于步骤四中向形成的光滑微胶囊球的混合溶液中加入浓度为0.2%~0.4%的戊二醛。

6.根据权利要求1所述的一种用海藻酸钙-壳聚糖固定化脂质酰基转移酶的方法，其特征在于步骤五中交联时间6h~8h。

7.根据权利要求1所述的一种用海藻酸钙-壳聚糖固定化脂质酰基转移酶的方法，其特征在于以固定化酶活力回收率为响应值，采用响应面法进行分析讨论最终确定最佳固定化条件，且酶活回收率可以达到80%。