[发明专利]一种用酶法使大豆油中生成维生素A的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用酶法使大豆油中生成维生素A的方法。

背景技术

维生素A缺乏（vitamin A deficient,VAD）是世界范围内，尤其是发展中国家最常见的微量营养素缺乏症之一，妇女和儿童是最容易受VAD影响的人群。VAD除导致干眼病之外，还与机体免疫功能、儿童生长发育、缺铁性贫血以及孕妇和胎儿健康有关。人体不能自身合成维生素A(VA)，植物来源的β - 胡萝卜素及其他胡萝卜素可在人体内合成维生素A。食品强化是提高人体维生素A营养水平的理想方法之一。我国人民食用植物油主要用于烹饪各种菜肴。以植物油为载体，强化VA，可避免因食入过量引起中毒，也不会因摄取不足而达不到强化的目的。

目前生产VA强化油的方法为在一级大豆油中，人工添加视黄醇乙酸酯和抗氧化剂。该发明是采用酶法作用于三级大豆油，将三级大豆油中的β-胡萝卜素转化成VA。所采用的酶是β -胡萝卜素-15，15′-加氧酶，该酶可以从动物体内提取，是生物酶对人体无危害。该发明运用了大豆油的自身成分转化VA，为生产VA强化油提供了新的途径。

发明内容

本发明利用大豆三级油中自有成分β-胡萝卜素通过β -胡萝卜素-15，15′-加氧酶催化断裂生成VA，使其反应直接在油相中进行。用酶法使大豆油中生成维生素A的方法通过以下步骤实现：一、β -胡萝卜素-15，15′-加氧酶的提取；二、β -胡萝卜素-15，15′-加氧酶催化大豆三级油生成VA。

利用酶法转化油中的β -胡萝卜素为VA与现有的VA强化油生产方法相比减少了视黄醇乙酸酯和抗氧化剂添加量。而且β -胡萝卜素-15，15′-加氧酶是从动物体内提取的生物酶，对人体没有危害。

具体实施方式

具体实施方式一：一种用酶法使大豆油中生成维生素A的方法通过以下步骤实现。一、β -胡萝卜素-15，15′-加氧酶的提取：首先选用60日龄三黄鸡，屠宰前一天，禁食12h，自由饮水。取空肠，用冰冷的生理盐水冲洗干净，用剪刀剖开肠道，取盖玻片轻轻挂下肠粘膜，将肠粘膜按1:5（W/V）的比例如加入pH7.4的PBS缓冲液，于0℃匀浆，1000r/min低温离心30min，取上清。将酶液保存在-70℃下备用；二、β -胡萝卜素-15，15′-加氧酶催化大豆三级油生成VA：取大豆三级油100g，加入一定量的β -胡萝卜素-15，15′-加氧酶，60 r/min机械搅拌，在温度40℃下加入脱氧胆酸钠，Tween 40，水浴反应一段时间，3500r/min离心20min，取上清样测定油中VA含量。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点在于步骤二中将油相中β -胡萝卜素-15，15′-加氧酶添加量为0.5%~3%，在此条件下进行大豆油生成VA其它步骤与具体实施方式一相同。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一的不同点在于步骤二中将油相中β -胡萝卜素-15，15′-加氧酶添加量为0.5%~3%，反应温度为30℃~50℃，在此条件下进行大豆油生成VA其它步骤与具体实施方式一相同。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一的不同点在于步骤二中将油相中β -胡萝卜素-15，15′-加氧酶添加量为0.5%~3%，反应温度为30℃~50℃，反应时间为4h~7h，在此条件下进行大豆油生成VA其它步骤与具体实施方式一相同。

具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一的不同点在于步骤二中将油相中β -胡萝卜素-15，15′-加氧酶添加量为0.5%~3%，反应温度为30℃~50℃，反应时间为4h~7h，脱氧胆酸钠添加量为0.01%~0.05%，在此条件下进行大豆油生成VA其它步骤与具体实施方式一相同。

    具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一的不同点在于步骤二中将油相中β -胡萝卜素-15，15′-加氧酶添加量为0.5%~3%，反应温度为30℃~50℃，反应时间为4h~7h，脱氧胆酸钠添加量为0.01%~0.05%，Tween 40添加量为0.01%~0.05%，在此条件下进行大豆油生成VA其它步骤与具体实施方式一相同。

具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一的不同点在于步骤二中将由单因素确定的结果再进一步优化得到固定化条件，优化的条件为β -胡萝卜素-15，15′-加氧酶添加量为0.5%~3%，反应温度为30℃~50℃，反应时间为4h~7h，脱氧胆酸钠添加量为0.01%~0.05%，Tween 40添加量为0.01%~0.05%，用优化结果进行大豆三级油中VA生成。在最优状态下VA最低含量为2mg/kg。其它步骤与具体实施方式一相同。