[发明专利]一种异氯硫磷胶体金快速检测试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于农药残留免疫分析技术领域，具体涉及一种异氯硫磷胶体金快速检测试纸条及其制备方法。

背景技术

异氯硫磷白色结晶固体，不溶于水，溶于丙酮、环己烷、甲苯、二甲苯、乙酸乙酯，用作农用杀虫剂，该物质对环境有危害，应特别注意对水体的污染。建议用控制焚烧法或安全掩埋法处置。雄性大鼠的经口LD50为400和460mg/kg，雌性大鼠经口值为330mg/kg，雄雌两性经皮分别为790和l，250mg/kL大鼠体内总代谢与二乙基化合物的水解相反，有相当大部分为烷基磷酸酯及其他二烷基化合物的水解作用。

目前，对农药残留的检测方法主要是仪器分析方法和酶联免疫分析方法(ELISA)等。仪器分析方法包括高效液相色谱法(High performance liquid chromatography，HPLC)、气相色谱法(Gas chromatography，GC)、薄层色谱法(Thin layer chromatography，TLC)、液-质串联法(HPLC-MS)和气-质串联法(GC-MS)等，这些仪器分析方法虽然可以达到较高的检测灵敏度，但需要复杂昂贵的仪器设备及专业操作人员，加之样品前处理繁琐费时、检测费用高，难以满足快速、在线检测的需要。ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)方法是常用的免疫检测方法，但是其却有操作步骤相对较多，检测时间较长，检测结果不够直观，不能在线进行检测等缺陷。因而ELISA方法的应用受到很大的限制。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的第一个技术问题是提供了克服上述异氯硫磷快速检测技术的不足，研制出一种特异、敏感、快速、简便的异氯硫磷胶体金快速检测试纸条。本发明所要解决的第一个技术问题是提供了上述试纸条的制备方法。

技术方案：本发明提供的技术方案是一种异氯硫磷胶体金快速检测试纸条，所述试纸条含有衬板和依次排列在衬板上的样品垫、金标结合垫、纤维素膜和吸水垫，所述衬板为不吸水的韧性材料，所述的韧性材料用硬质塑胶条或不吸水硬纸条制成，所述金标结合垫内吸附有异氯硫磷金标抗体，所述纤维素膜上有隐形检测线和隐形对照线，所述隐形检测线用异氯硫磷半抗原偶联的载体蛋白溶液印制，所述隐形对照线用兔抗鼠IgG抗体印制。所述吸水垫为吸水能力较强的吸水滤纸或滤油纸。

其中，上述异氯硫磷金标抗体为胶体金标记的异氯硫磷单克隆抗体。

其中，上述偶联异氯硫磷半抗原的载体蛋白为牛血清白蛋白BSA、鸡卵清白蛋白OVA或人血清白蛋白HAS中的一种或几种。

在试纸条的吸水垫上设有手柄端保护膜，在样品垫上设有样品浸入端保护膜。所述的保护膜为不透明的胶膜，样品垫、金标结合垫对应的保护膜上印制有待测样品标记线，该标记线偏向样品垫一侧约0.5厘米处。

其中，上述样品垫用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜中的一种或几种制成。

其中，上述纤维素膜为硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜中的一种或几种。

上述异氯硫磷胶体金快速检测试纸条的制备方法包括以下步骤：

1)异氯硫磷半抗原的合成；

2)异氯硫磷半抗原与载体蛋白偶联得到异氯硫磷半抗原偶联的载体蛋白溶液；

3)异氯硫磷金标抗体的制备；

4)金标结合物垫的制备；

5)兔抗鼠IgG抗体的制备；

6)异氯硫磷半抗原偶联的载体蛋白溶液和兔抗鼠IgG抗体包被纤维素膜；

7)试纸条的组装。

所述步骤1)中异氯硫磷半抗原的合成步骤如下：

81)O-甲基-O-(2-氯-4-硝基苯基)硫代磷酰氯的合成：称取2-氯-4-硝基苯酚3.7g用乙腈溶解；常温下，将溶液逐滴加入20mL乙腈溶解的O-甲基硫代磷酰氯3.83g、粉状K₂CO₃8.7g混合溶液，滴完后，继续反应1小时，反应完毕后真空过滤，蒸去溶剂，得黄色油状物，柱层析，用体积比8：1的石油醚/二氯甲烷洗涤，蒸去溶剂得淡黄色油状液体5.9g；