[发明专利]一种黄曲霉毒素半抗原、人工抗原及其制备方法

权利要求书

1.一种黄曲霉毒素半抗原AFB1-O-CMO，其特征在于，分子结构式为：

2.根据权利要求1所述的一种黄曲霉毒素半抗原AFB1-O-CMO的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)甲醇：双蒸水：吡啶溶液按体积比为4:1:1的比例混合后，再将黄曲霉毒素与半羧基羟胺盐酸CMO按质量比1:2混合后溶解于上述混合溶液中；

(2)对上述混合物80～90℃加热回流3～4h，直到所有的黄曲霉毒素完全转化为黄曲霉毒素半抗原；

(3)用旋转蒸发仪将溶剂旋干，加水后，用2mol/L的H₂SO₄调节PH＝4，然后用5ml乙酸乙酯萃取2～3次，合并有机相，并用水洗涤至少2次，除去CMO，浓缩旋干液体，得到黄色油状半固态物质，即为黄曲霉毒素半抗原AFB1-O-CMO。

3.一种黄曲霉毒素人工抗原，其特征在于，所述人工抗原的分子结构式为：

所述载体蛋白Protein是大豆11S球蛋白酸性亚基。

4.根据权利要求3所述的一种黄曲霉毒素人工抗原的制备方法，其特征在于，采用EDC活性酯法合成，具体步骤如下：

(1)将黄曲霉毒素半抗原溶于2ml体积浓度为25％乙醇溶液中，称取4.5mg大豆11S球蛋白酸性亚基，溶于2ml纯水中，黄曲霉毒素半抗原与大豆11S球蛋白酸性亚基的投料摩尔比为60:1；

(2)加入50mg的EDC，室温下，避光搅拌反应48h；

(3)反应期间，再加入EDC各2次，每次50mg；

(4)反应产物在4℃搅拌下用PBS透析3天，每天换液3～6次，透析后得到纯化的黄曲霉毒素人工抗原AFB1-O-AS储存于-20℃。

5.根据权利要求4所述的一种黄曲霉毒素人工抗原的制备方法，其特征在于，所述大豆11S球蛋白酸性亚基的制备方法包括以下步骤：

(1)以1:5的体积比将大豆11S球蛋白溶于Tris-HCl缓冲液，加β巯基乙醇调节混合溶液的整体浓度至0.015mol.L^-1，调pH为8.0，在90℃条件下水浴30min；

(2)4℃，10000r·min^-1条件下离心20min，得到沉淀,调pH至5.0，冷冻干燥后即得大豆球蛋白碱性亚基；

(3)收集除去碱性亚基的上清液,调pH至5.0，4℃、6500r·min^-1条件下离心20min分离沉淀，调pH至中性，冷冻干燥后即得大豆11S球蛋白酸性亚基。