[发明专利]一种肽核酸化合物及其制备方法

权利要求书

1.一种肽核酸化合物，其特征在于，所述的肽核酸化合物的碱基序列为5’-CACTTACTGGGATAGCGG-3’。

2.根据权利要求1所述的一种肽核酸化合物，其特征在于所述的肽核酸化合物由单体构成，所述的单体用下列通式表示：

G为腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶四种碱基中的一种。

3.根据权利要求1所述的一种肽核酸化合物的制备方法，其特征在于制备方法包括下述步骤：（1）将氨基保护的肽核酸单体接到固相载体上；

（2）脱除保护基使氨基游离出来；

（3）下一个氨基保护的肽核酸单体与载体上的肽核酸的氨基偶合反应生成肽键；

（4）重复上述步骤至肽核酸序列合成完成，序列为5’-CACTTACTGGGATAGCGG-3’；

（5）将肽核酸序列从固相载体上-裂解下来，并脱除所有侧链保护基；

（6）将步骤（5）得到的产物经过凝胶柱分离和反向HPLC纯化，得到最终产物。

4.根据权利要求3所述的一种肽核酸化合物的制备方法，其特征在于制备方法包括下述步骤：

（1）称取固相多肽合成树脂于反应器中，充分洗涤后加入PNA-C、HOBt、DCC、DCM和DMF，室温下搅拌，以DCM和NMP交替洗涤后以TFA/DCM 溶液脱保护后用DCM和NMP交替洗涤树脂；

（2）重复步骤（1）的操作，将目标PNA序列中的单体按从5’到3’的顺序依次接入，序列为5’-CACTTACTGGGATAGCGG-3’；

（3）在反应器中缓慢加入重量比为TFA/TIS/H₂O=95/2.5/2.5的溶液，反应后过滤并用氮气吹去大部分的溶剂，先后用无水乙醚和30%乙酸水溶液洗涤，再用1.5:1的乙腈/水和30%乙酸水溶液交替洗涤，合并洗液，减压蒸馏后冷冻干燥得到粗产物；

（4）将粗产物溶于0.5 mol/L的乙酸溶液，滤除不溶物，使用凝胶柱纯化，收集淋洗曲线第一个主峰处的产物，冷冻干燥；

（5）粗产物经HPLC纯化，经过HPLC纯化后得到最终产品。

5.根据权利要求3所述的一种肽核酸化合物的制备方法，其特征在于制备方法包括下述步骤：

（1）称取100mg固相多肽合成树脂于反应器中，充分洗涤后加入PNA-C 50mg、HOBt 34mg、DCC 51mg、DCM 3mL和DMF 0.5mL，室温下搅拌3h，以DCM和NMP交替洗涤后以25%的TFA/DCM 溶液脱保护30分钟后用DCM和NMP交替洗涤树脂；

（2）重复步骤（1）的操作，将目标PNA序列中的单体按从5’到3’的顺序依次接入，序列为5’-CACTTACTGGGATAGCGG-3’；

（3）在反应器中缓慢加入重量比为TFA/TIS/H2O=95/2.5/2.5的溶液，反应3小时后过滤并用氮气吹去大部分的溶剂，先后用无水乙醚和30%乙酸水溶液和洗涤，再用1.5:1的乙腈/水和30%乙酸水溶液交替洗涤，合并洗液，减压蒸馏后冷冻干燥得到粗产物；

（4）将粗产物溶于2-3毫升0.5 mol/L的乙酸溶液，滤除不溶物，使用凝胶柱纯化，淋洗液为0.5 mol/L乙酸溶液，流速为1ml/min，收集淋洗曲线第一个主峰处的产物，冷冻干燥；

（5）粗产物经HPLC纯化，色谱柱为C18柱，流动相为：A：0.1%TFA/H₂O，B：70%CH₃CN/0.1%TFA/H₂O，流速为1mL/min，经过HPLC纯化后得到最终产品。

6.根据权利要求3所述的一种肽核酸化合物的制备方法，其特征在于制备方法包括下述步骤：（1）称取150mg固相多肽合成树脂于反应器中，充分洗涤后加入PNA-C 50mg、HOBt 34mg、DCC 51mg、DCM 3mL和DMF 0.5mL，40摄氏度下搅拌1h，以DCM和NMP交替洗涤后以25%的TFA/DCM 溶液脱保护30分钟后用DCM和NMP交替洗涤树脂；

（2）重复步骤（1）的操作，将目标PNA序列中的单体按从5’到3’的顺序依次接入，序列为5’-CACTTACTGGGATAGCGG-3’；

（3）将反应后的树脂放入氟化氢裂解仪中，加入1滴苯甲醚，将裂解仪抽真空并冷却，加入2mL液态氟化氢，-5℃反应2小时，使用油泵抽除未反应的氟化氢；先后用无水乙醚和30%乙酸水溶液和洗涤，再用1.5:1的乙腈/水和30%乙酸水溶液交替洗涤，合并洗液，减压蒸馏后冷冻干燥得到粗产物；

（4）将粗产物溶于2毫升0.5 mol/L的乙酸溶液，滤除不溶物，使用凝胶柱纯化，淋洗液为0.5 mol/L乙酸溶液，流速为1mL/min，收集淋洗曲线第一个主峰处的产物，冷冻干燥；

（5）粗产物经HPLC纯化得到最终产品。