[发明专利]一种肽核酸化合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于化学合成领域，涉及一种肽核酸化合物及其制备方法，具体是涉及一种具有抑制黑色素生成效果的肽核酸化合物及其制备方法。

背景技术

酪氨酸酶在人体黑色素形成过程中起着关键作用，黑色素细胞内的酪氨酸在酪氨酸酶的作用下转换为多巴，并进一步氧化为多巴醌，多巴醌经过一系列中间产物最终形成真黑色素。通过减少酪氨酸酶的生成或抑制酪氨酸酶的活性实现抑制黑色素生成的效果在皮肤病防治、肿瘤治疗以及美容领域都有着重要的意义。近年来随着分子生物学的发展基因干扰技术为减少酪氨酸酶生成提供了一条可行的途径，其原理是根据碱基互补配对特性将与酪氨酸酶基因片段互补的RNA或肽核酸(PNA)序列引入黑色素细胞，通过引入序列与目标基因片段的特异性结合阻碍酪氨酸酶基因的表达，从而实现减少酪氨酸酶生成进而减少黑色素生成的效果。

目前所用的干扰序列有RNA和PNA，其中PNA以中性的肽链酰胺2-氨基乙基甘氨酸键取代了DNA中的戊糖磷酸二酯键骨架，不仅可以通过Watson-Crick碱基配对的形式识别并结合DNA或RNA序列，形成稳定的双螺旋结构，又由于其不带负电荷，与DNA和RNA之间不存在静电斥力，结合的稳定性和特异性都大为提高，成为基因干扰治疗中更加安全高效的手段。

发明内容

要解决的技术问题：本发明提出了一种肽核酸化合物TDS的制备方法及应用，它与黑色素细胞序列中酪氨酸酶的基因序列片段互补，并且与酪氨酸酶基因以外的任何人类已知基因序列无同源性，TDS通过与酪氨酸酶的特异结合达到抑制酪氨酸酶和黑色素生成的效果。

技术方案：本发明公开了一种肽核酸化合物，其碱基序列为5’-CACTTACTGGGATAGCGG-3’，记为TDS。

该肽核酸化合物通过以下四种肽核酸单体合成：

肽核酸序列可通过固相多肽合成法制备，制备方法如下：

(1)将氨基保护的肽核酸单体接到固相载体上；

(2)脱除保护基使氨基游离出来；

(3)下一个氨基保护的肽核酸单体与载体上的肽核酸的氨基偶合反应生成肽键；

(4)重复上述步骤至肽核酸序列合成完成，序列为5’-CACTTACTGGGATAGCGG-3’；

(5)将肽核酸序列从固相载体上列接下来，并脱除所有侧链保护基；

(6)将上述产物经过凝胶柱分离和反向HPLC纯化，得到最终产物。其中肽核酸单体用下列通式表示：

G为腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶四种碱基中的一种。

有益效果：经飞行时间质谱鉴定，所得产物的分子量与理论值相符。将培养后的人黑色素瘤细胞株A375加入培养皿中，控制细胞密度为2×10⁴，分别加入终浓度为10、20、30、40、50ppm的TDS，培养24小时后分别测量细胞存活数、细胞酪氨酸酶活性和黑色素含量，并记录其与空白对照组(不加入TDS)结果的百分比值，其结果如下：

细胞存活数：