[发明专利]一种甲氧苄啶半抗原化合物T1制备完全抗原的方法和应用

权利要求书

1.一种甲氧苄啶半抗原化合物T1的制备方法，其特征在于：

甲氧苄啶半抗原化合物T1结构简式如下：

制备步骤为：在100mL的三颈瓶中依次加入 10mL吡啶、2g丁二酸酐、5mg 4-二甲氨基吡啶，60℃水浴加热磁力搅拌至溶液澄清；另以 10mL 吡啶溶解2.9g甲氧苄啶并滴加到所述三颈瓶中，继续搅拌反应3天；采用薄层色谱法，以甲醇︰三氯甲烷体积比为1︰5作为展开剂监控反应进程；减压蒸馏将溶剂全部蒸走，得到淡黄色油状物；继续滴加质量体积比为10%的NaHCO₃水溶液至不再产生浑浊，过滤并调节上清液在酸性条件下重结晶析出白色固体，离心烘干即得产品甲氧苄啶半抗原化合物T1。

2.用权利要求1所述方法制得的甲氧苄啶半抗原化合物T1制备甲氧苄啶完全抗原的方法，其特征在于：将甲氧苄啶半抗原化合物T1与载体蛋白偶联后制备得到甲氧苄啶完全抗原。

3.根据权利要求2所述甲氧苄啶半抗原化合物T1制备甲氧苄啶完全抗原的方法，其特征在于：所述载体蛋白为牛血清白蛋白BSA、鸡卵清白蛋白OVA、匙孔血蓝蛋白KLH、血蓝蛋白LPH或人血清白蛋白HAS中的一种。

4.根据权利要求3所述甲氧苄啶半抗原化合物T1制备甲氧苄啶完全抗原的方法，其特征在于：当载体蛋白为BSA时，具体步骤为：

（1）甲氧苄啶半抗原化合物T1的活化：将甲氧苄啶半抗原化合物T1用DMF溶解，按甲氧苄啶半抗原化合物T1︰三正丁胺︰氯甲酸异丁酯的摩尔比为1︰1.2︰1.2比例添加反应物，0℃反应1h，得到活化的甲氧苄啶半抗原化合物T1溶液；

（2）载体蛋白BSA溶液的配制：取BSA，使甲氧苄啶半抗原化合物T1︰BSA的摩尔比为100︰1，用 0.01M pH6.5的磷酸盐缓冲液溶解BSA，0℃预冷30min，其中溶解后的BSA浓度大于3mg/mL，且磷酸盐缓冲液与DMF的体积比例为5︰1，得到BSA溶液；

（3）甲氧苄啶完全抗原的制备：在0℃条件下，将步骤（1）所得14.5mg/mL活化的甲氧苄啶半抗原化合物T1溶液1mL，慢速滴加到步骤（2）所得22mg/mL BSA溶液3mL中，0℃条件下反应2h，然后室温下反应12h；用PBS缓冲液透析3天，期间换水8次，即得到甲氧苄啶完全抗原T1-MA-BSA。

5.用权利要求2或4所述方法制备的甲氧苄啶完全抗原的应用，其特征在于：通过甲氧苄啶完全抗原免疫得到多克隆抗体和/或单克隆抗体，用于检测甲氧苄啶。