[发明专利]一种罗伊乳酸杆菌的电转化方法

权利要求书

1.一种罗伊乳酸杆菌的电转化方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、罗伊乳酸杆菌感受态细胞制备

（1）、在MRS固体培养基划线复苏罗伊乳酸杆菌，然后挑取罗伊乳酸杆菌单菌落接种至5 mL的 MRS液体培养基中，置于37℃下过夜培养，得到种子液；将种子液接种到50 mL的MRS液体培养基中，接种量为MRS液体培养基体积的10%，然后置于37℃静置培养，当OD值达到1.0时，取出冰浴10 min，然后4℃、6000 r/min离心15 min，弃上清，收集菌体细胞；

（2）、洗涤所收集的菌体细胞，洗涤方法为：先用10mmol/L的MgCl₂水溶液洗涤，再用蔗糖甘油混合溶液洗涤，最后用体积浓度为10%的甘油水溶液洗涤；洗涤结束后加入体积浓度为10%的甘油水溶液，吹打使菌体细胞悬浮，即制备出罗伊乳酸杆菌感受态细胞，分装，置于-80℃保存，备用；

所述蔗糖甘油混合溶液为，体积比为1:1的0.5 mol/L蔗糖水溶液和体积浓度为10%的甘油水溶液的混合物；  

步骤二、将所制备的罗伊乳酸杆菌感受态细胞从-80℃取出，置于冰上解冻5 min，加入2μL浓度为0.2μg/μL的质粒载体pLEM415-cel15，混匀后将所得混合物转移至预冷的电击杯中，冰浴5 min，轻震电击杯使混合物进入电击杯底部；然后在电阻200Ω、电容25μF、电压1.5 kv/mm的条件下，电击转化感受态细胞，之后将混合物转移到1000μL MRS液体培养基中，置于37℃复苏培养2 h后，涂布于含红霉素的MRS固体培养基上培养24-48 h。

2.如权利要求1所述的罗伊乳酸杆菌的电转化方法，其特征在于：所述MRS液体培养基，每升培养基中含有10.0 g 蛋白胨、 10.0 g牛肉膏、 5.0 g酵母膏、2.0 g柠檬酸氢二铵、 20.0 g葡萄糖、1.0 mL吐温80、5.0g乙酸钠、2.0 g磷酸氢二钾、0.58 g硫酸镁、0.25 g硫酸锰，余量为水；pH值为6.2-6.6。

3.如权利要求1所述的罗伊乳酸杆菌的电转化方法，其特征在于：所述MRS固体培养基：每升培养基中含有10.0 g 蛋白胨、 10.0 g牛肉膏、 5.0 g酵母膏、2.0 g柠檬酸氢二铵、 20.0 g葡萄糖、1.0 mL吐温80、5.0g乙酸钠、2.0 g磷酸氢二钾、0.58 g硫酸镁、0.25 g硫酸锰、18.0 g琼脂，余量为水；pH值为6.2-6.6。