[发明专利]铁线莲优雅紫的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种园林植物组配方法，尤其是涉及一种铁线莲的组培方法，属于繁殖技术领域。

背景技术

铁线莲隶属毛莨科(clematis fusca var.violacea)铁线莲属(Clematis L.)，是一类观赏价值高、具有多种抗逆性的藤本植物。铁线莲属植物为多年生木质或草质藤本，少数为直立灌木。叶对生，有柄。单叶、三出复叶或羽状复叶，全缘、有锯齿或分裂。聚伞花序、圆锥花序或单生。铁线莲属植物花形新颖别致，变化大，花朵色泽调和，独具风采；花期较长，适应性强，并具有较强的耐寒性，在在国际观赏园艺中占有重要地位。在追求花卉品种新、奇、特的今天，铁线莲属植物的观赏价值越来越受到国内外园艺界的重视。铁线莲种子繁殖率很低，扦插繁殖生根率也不高，利用组织培养和体胚发生是极具应用前景的途径，很多植物(如仙客来)利用组织培养得到大规模的生产，而对铁线莲的组织培养国内研究较少，发展速度相对滞后，严重影响了优良铁线莲品种的产业化发展。因此对铁线莲进行组织培养研究，探索高频率再生植株的形态发生途径和离体培养条件，用于指导种苗生产,同时也为研究铁线莲属植物离体再生规律提供一些资料，是十分必要的。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种繁殖周期短，繁殖系数高且易于生根的一种铁线莲Viticella G.‘Purpurea Plena Elegans’组织培养方法。

为了解决上述目的，本发明所采用的技术方案为：

一种铁线莲Viticella G.‘Purpurea Plena Elegans’(优雅紫)的组织培养方法，包括以下步骤：

(1)获取无菌苗材料：

于春季剪取铁线莲新萌发的带芽茎段，自来水下冲洗30-60min后于超净工作台上，用体积浓度70—75％的乙醇浸泡15-20s，再用1％(质量浓度)的升汞溶液浸泡8-15分钟后，用无菌水冲洗5-8次，吸干带芽茎段表面水分；

(2)初代培养：

取上述无菌处理后的带芽茎段，切成1cm长的小段，每段上至少带一枚发育饱满，无病虫危害状的健康芽，接种于pH值为5.6-6.0的诱导培养基上，所述带芽茎段在诱导培养基诱导培养后7天开始产生丛生芽，继续培养4周后，进行步骤(3)的继代增殖培养；

(3)增殖培养：

带有丛生芽的铁线莲接种于pH值为5.8-6.2的不定芽增殖培养基上进行增殖培养，增值培养30天,每日光照16h，增殖培养温度为24-26℃，光照强度为30-40μmol/m²s；

(4)生根壮苗培养：

在步骤(3)中不定芽增殖培养基中诱导出丛生芽后，将丛生芽切分成单株或2.0-3.5cm长的茎段，接种于pH5.6-6.0的生根壮苗培养基中，暗培养7-10天后进行光照培养；当根长为2-4cm时,可进行驯化移栽。

进一步地，步骤(2)中，所述的诱导培养基成分为1/2MS+0.2mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.05mg/LNAA+3％(质量浓度)蔗糖+0.7％(质量浓度)琼脂；pH值为5.8。

进一步地，步骤(3)中，所述的增殖培养基成分为1/2MS+0.2mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.05mg/LNAA+3％(质量浓度)蔗糖+0.7％(质量浓度)琼脂+10％(质量浓度)椰汁+0.1mgVc。

进一步地，步骤(4)中，所述的生根培养基成分为1/3MS+NAA0.1-0.5mg.L^-1+0.5g活性炭。

有益效果：与现有技术相比，本发明所提供的铁线莲组织培养方法，繁殖周期短，繁殖系数高，易生根，植物的根系粗壮，新稍长势好，茎秆粗壮，驯化易成活。

具体实施方式：

下面将根据具体实施例对本发明进行说明：

在本实施方式中，各培养基中应用到的基础培养基成分MS均采用相同的配方，其中，MS的配方如下：

大量元素(mg/l)包括：

微量元素(mg/l)包括：

铁盐(mg/l)包括：

FeSO₄·7H₂O                27.8

Na₂-EDTA·2H₂O             37.3；

有机物质(mg/l)包括：

6-BA：6-苄氨基腺嘌呤；