[发明专利]一种快速提取杉木总RNA的方法

权利要求书

1.一种快速提取杉木总RNA的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）在1.5 ml离心管中混匀如下液体：1 ml SDS提取液和40-60μl 巯基乙醇，记为提取液A； 

（2）取90-120mg新鲜杉木材料放到2 ml离心管中，并加入钢珠，迅速放到液氮中速冻，用高通量组织研磨仪研磨成粉末； 

（3）向研磨后的离心管中迅速加入0.8-1.5 ml提取液A，涡旋混匀，室温静置8-15 min，4℃，13000g离心10-20 min；

（4）吸取500-700μl上清至一新的1.5 ml离心管中，加入200-400μl 5 mol/L NaCl和400-600μl氯仿，混匀，4℃，13000g离心4-7 min；

（5）吸取500-700μl上清，加入等体积的水饱和酚：氯仿v/v=1:1的混合液，混匀，4℃，13000g离心4-7 min；

    （6）吸取300-500μl上清于一新的1.5 ml离心管中，加入等体积预冷的异丙醇，于室温下在侧摆摇床上摇匀10 min；

    （7）将上述摇匀后的液体吸入到离心柱中，4℃，13000g离心1-3 min；

    （8）加入75%预冷的乙醇洗涤沉淀，4℃，13000g离心1-3 min；

    （9）重复步骤（8）；

    （10）弃液，4℃，13000g空离心1-3 min；

    （11）更换底部的收集管为新的1.5 ml无RNA酶离心管，向上述离心柱中央加入30-50μl DEPC水，静置2-5 min，4℃，13000g离心1-3 min；

    （12）将离心后离心管底部的液体重新吸入离心柱中，静置2-5 min，4℃，13000g离心1-3 min；

    （13）弃离心柱，将新的收集管-20℃保存备用。

2.根据权利要求1的所述的快速提取杉木总RNA的方法，其特征在于：步骤（1）所述SDS提取液的配置：0.25M NaCl，0.05M Tris-HCl、pH=7.5，20mM EDTA、pH=8.0，1%SDS。

3.根据权利要求1的所述的快速提取杉木总RNA的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）在1.5 ml离心管中混匀如下液体：1 mlSDS提取液和50μl 巯基乙醇，记为提取液A； 

（2）取100mg新鲜杉木材料放到2 ml离心管中，并加入2个5 mm钢珠，迅速放到液氮中速冻，用高通量组织研磨仪研磨成粉末； 

（3）向研磨后的离心管中迅速加入1 ml提取液A，涡旋混匀，室温静置10 min，4℃，13000g离心15 min；

（4）吸取600μl上清至一新的1.5 ml离心管中，加入300μl 5 mol/L NaCl和500μl氯仿，混匀，4℃，13000g离心5 min；

（5）吸取600μl上清，加入等体积的水饱和酚：氯仿v/v=1:1的混合液，混匀，4℃，13000g离心5 min；

    （6）吸取400μl上清于一新的1.5 ml离心管中，加入等体积预冷的异丙醇，于室温下在侧摆摇床上摇匀10 min；

    （7）将上述摇匀后的液体吸入到离心柱中，4℃，13000g离心1 min；

    （8）加入500μl 75%预冷的乙醇洗涤沉淀，4℃，13000g离心1 min；

    （9）重复步骤（8）；

    （10）弃液，4℃，13000g空离心1 min；

    （11）更换底部的收集管为新的1.5 ml无RNA酶离心管，向上述离心柱中央加入50μl DEPC水，静置2 min，4℃，13000g离心1 min；

    （12）将离心后离心管底部的液体重新吸入离心柱中，静置2 min，4℃，13000g离心1 min；

    （13）弃离心柱，将新的收集管-20℃保存备用。