[发明专利]一种灰葡萄孢菌剂的制备方法

权利要求书

1.一种灰葡萄孢菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）固态培养基的制备

将葡萄酒酒泥与麸皮按质量比1:0.75-1:1.5混合，控制固态培养基基质的含水量为50%-60%，充分混匀后灭菌；

2）接种灰葡萄孢

向固态培养基质中接种液体灰葡萄孢菌种；

3）固态发酵

将接种后的固态培养基质置于8-15℃条件下进行固态发酵，保持发酵环境空气循环，培养5-14d，至基质长满白色绒毛状的灰葡萄孢菌丝后翻料，将发酵温度升高至18-22℃再培养3-5d，至基质表面布满绿色或灰黑色孢子囊后终止发酵；

4）孢子收集

将发酵所得培养物于45℃风干至含水量小于30%，粉碎后过200目筛，收集得到灰葡萄孢菌剂；

所述固体培养基的灭菌工艺为：100℃灭菌30min-60min；

所述液体灰葡萄孢菌种的制备方法如下：

1）种子培养基制备：取质量比为1:1的马铃薯和大麦芽，并粉碎，马铃薯粉碎至直径不大于1cm小块，大麦芽粉碎至粒径20目，加入马铃薯质量5倍的水，于60℃糖化8h，过40目筛除渣，滤液用水补充至糖化前体积，121℃湿热灭菌20min；

2）菌株选取：所述菌株选自中国农业微生物菌种保藏管理中心保藏的灰葡萄孢ACCC36257或ACCC36258；

3）液体种子培养：

从所选菌株刮取原种，制备生物量为10⁶-10⁸CFU/mL的原种孢子悬浮液，按体积比4%-10%的量接种于种子培养基中，10℃-20℃条件下发酵1-2d；

所述固态培养基还包括胶体壳聚糖，其添加量为所述基质总质量的0.05%-0.5%；

所述胶体壳聚糖由乙酰度达到75%以上的壳聚糖粉与12mol/L浓盐酸或冰乙酸按质量体积比5：1-5：3混合搅拌酸化后加水稀释获得。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述胶体壳聚糖的浓度为10g/L-100g/L。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3）中的液体种子发酵方式为振荡发酵或机械搅拌发酵。