[发明专利]利用白玉米面为原料制备饲用沼泽红假单胞菌的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物发酵技术领域，特别是一种利用白玉米面为原料制备饲用沼泽红假单胞菌的方法。

背景技术

按照东秀珠(2001)《常见细菌系统鉴定手册》分类，沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris属于紫色非硫细菌、红假单胞菌属，在自然界的碳素、氮素、硫素转化循环中起重要作用，是所在环境物质循环及能量流动的主要参加者之一，具有富集多种微量元素的能力，菌体营养丰富，蛋白质含量高，且富含多种生物活性物质，并且活性菌株含有某些抗病抗逆性物质，并具有适应性强，能耐受高浓度的有机废水和较强的分解转化能力，对酚、氰等毒物也有一定的耐受和分解能力等特点。沼泽红假单胞菌的用途很多，被广泛应用于农业、渔业、环保等领域，可用于水质净化、污水处理、饲料级微生物添加剂等。关于饲用微生物方面，沼泽红假单胞菌是我国农业部允许在饲料中直接添加的活性微生物之一，是优质的饲料添加剂，在畜禽养殖方面，沼泽红假单胞菌可作为一种饲料蛋白补充，还可以起到益生素的作用，它作为益生菌对有害菌起到抑制和排斥作用，能保持正常的菌群，促进营养物质的消化吸收，参与消化酶生成及B族维生素的合成，减少氨及有害物质的产生，提高局部免疫力和抗病力；在水产养殖方面，具有改善水质，促进生长，预防鱼病的作用，对产量和成活率均有明显的提高，是优质的饲料添加剂。

沼泽红假单胞菌生长方式是利用各种有机化合物作碳源和电子供体进行光照厌氧生长，也可好氧黑暗条件下进行化能异养生长。国内生产沼泽红假单胞菌一般采用塑料桶等，利用沼泽红假单胞菌在光照厌氧条件下生长的特性生产，生产周期长，一般7天以上，沼泽红假单胞菌的发酵培养基配方成分的配搭较复杂，一般需要碳源、氮源、磷源、微量元素、维生素等几种或十几种营养成分，调节酸碱度，实际配制操作过程繁琐，因此，难以有效推广应用，满足不了饲料养殖业对饲料生产上的需要，其创新势在必行。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用白玉米面为原料制备饲用沼泽红假单胞菌的方法，可有效解决饲用沼泽红假单胞菌的制备，以满足饲料养殖业对饲料生产的需要。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是提供一种利用白玉米面为原料制备饲用沼泽红假单胞菌的方法，包括以下步骤：

A.制备菌种，方法是：

(1)菌种活化，采用沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)AS1.2352，将沼泽红假单胞菌AS1.2352菌株接入玻璃培养皿内的ATYP琼脂液体培养基中，培养基液面上滴加液体石蜡封注液面，在28～30℃下，用40W白炽灯距灯最下端距离15-25cm处照射，厌氧静置培养5d～7d，得活化菌种；

(2)种子培殖，方法是：首先配制种子用培养基，将甘油1.0g、酵母膏1.0g、磷酸氢二钾0.3g，微量元素溶液0.05mL，维生素溶液0.15mL，水1000mL混合配制成培养基，将培养基装入培养皿中，每250ml的容积内装入培养基100mL，在0.1Mpa灭菌30min，灭菌后冷却至30℃备用；然后，将步骤(1)得到的活化菌种接种于已灭菌冷却后的培养基中，接种量为每250mL的容积内接入培养基重量的3～5％，在转速80r/min，28～30℃条件下培养60～72h，得到种子，革兰氏染色阴性，镜检无杂菌，种子液OD₆₆₀值达到0.5以上，沼泽红假单胞菌菌数达到0.5×10⁸个/mL以上；

B.制备饲用沼泽红假单胞菌，方法是：

(1)制备液体发酵培养基：白玉米面2.0g、酵母膏1.0g和水1000mL，其中，白玉米面过0.42mm孔径筛，用部分水润湿，酵母膏再取部分水溶解成酵母膏溶液，然后润湿的白玉米面及酵母膏溶液混合均匀加入10L发酵罐内，并补加入剩余的水，罐压控制在0.1～0.11Mpa之内，在位灭菌30min得灭菌后的液体发酵培养基；

(2)接种，将液体发酵培养基冷却至30℃，罐内压力减至0.01Mpa以下，接入步骤A中得到的种子，接种比例为液体发酵培养基重量的3～5％；

(3)发酵培养，将已冷却接种的液体发酵培养基装入10L发酵罐中，液体发酵培养基的装液量为7L，使罐压保持在0.03～0.05Mpa之间，控制调节发酵温度28～30℃，搅拌转速100r/min，通入发酵罐的无菌空气流量为1.5NL/min，发酵时间72～96h，得沼泽红假单胞菌发酵液，镜检无杂菌，发酵液OD₆₆₀值达到1.5以上，沼泽红假单胞菌菌数达到5×10⁸个/mL以上；