[发明专利]邻苯二甲酸在氨基酸分析中的应用

权利要求书

1.邻苯二甲酸在氨基酸分析中的应用，其特征在于：在用于氨基酸液相色谱－质谱联用分析的流动相中添加邻苯二甲酸，邻苯二甲酸的添加浓度为0.005～0.1mmol/L。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的流动相由水相和有机相组成，且水相和有机相中均含有甲酸与甲酸铵。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的水相中含有5～10mmol/L的甲酸铵和0.1V％～0.3V％的甲酸，所述的有机相中含有1～5mmol/L的甲酸铵和0.1V％～0.3V％的甲酸。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的水相由0.005～0.1mmol/L邻苯二甲酸、5～10mmol/L甲酸铵、0.1V％～0.3V％甲酸及水形成；所述的有机相由0.005～0.1mmol/L邻苯二甲酸、1～5mmol/L甲酸铵、0.1V％～0.3V％甲酸、0.1V％甲醇及乙腈形成。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的氨基酸液相色谱－质谱联用分析，包括如下步骤：

a)配制一系列由标准溶液和内标溶液形成的工作溶液；

b)采用本发明所述的添加有邻苯二甲酸的流动相，对步骤a)配制的一系列工作溶液进行液相色谱串联质谱分析，绘制内标法标准曲线；

c)采用与步骤b)相同的流动相，对待测的游离氨基酸样品进行液相色谱串联质谱分析；

d)根据已建立的内标法标准曲线计算样品中的氨基酸浓度。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述液相色谱的分离方式为亲水相互作用色谱(HILIC)，所述质谱的检测方式为多反应监测(MRM)。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述标准溶液的配制方法如下：准确称取苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、半胱氨酸、丙氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丝氨酸、精氨酸、谷氨酸、天门冬酰胺、组氨酸、γ-氨基丁酸、赖氨酸、天门冬氨酸和瓜氨酸、羟基脯氨酸、2-氨基丁酸、β-丙氨酸各10mg及酪氨酸5mg中的至少一种标准品，用100mL由乙腈与水按体积比为1:1形成的混合溶剂超声溶解后，再加入混合溶剂稀释至刻度，再根据需要稀释成不同浓度的标准溶液。

8.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述内标溶液的配制方法如下：准确配制含有四种同位素氨基酸内标物的内标储备液，其中：d5-苯丙氨酸和d3-丙氨酸的浓度均为10μg/mL，d3-丝氨酸和d5-谷氨酸的浓度均为100μg/mL，使用时稀释成所需浓度的内标溶液。

9.如权利要求5所述的应用，其特征在于，从生物组织样本制备游离氨基酸样品的方法如下：称取生物组织样本每10mg加入100μL去离子水，充分匀浆；取匀浆液20μL，加入内标溶液20μL和160μL甲醇；涡旋充分后，离心；取上层清液40μL至新的样品管中，氮气吹干；使用200μL由乙腈与水按体积比为1:1形成的混合溶剂重新溶解。