[发明专利]一种黄瓜受低硝态氮胁迫标记基因及其应用

权利要求书

1.一种用于鉴定黄瓜植株是否受到低硝态氮胁迫的标记基因锌指同源异型域转录因子CsZHD5，其核苷酸序列SEQ ID No.1（534 bp）；其特征是：该基因能够在低硝态氮胁迫条件下的不同黄瓜品种中稳定上调表达。

2.以黄瓜低硝态氮胁迫标记基因锌指同源异型域转录因子CsZHD5的CDS序列为模板，进行qRT-PCR引物的设计，SEQ ID No.2和SEQ ID No.3。

3.提取待测黄瓜叶片总RNA，并反转录合成cDNA第一链，以此为模板，以CsEF1α（SEQ ID No.4和SEQ ID No.5）为内参基因，以权利要求2所述序列为引物，进行qRT-PCR鉴定（以北京全式金荧光定量试剂盒Q141为例）：

qRT-PCR反应体系如下：

                    上游引物（10 μM）           0.5 μL

                    下游引物（10 μM）           0.5 μL

           2× TransStart Tip^? Green qPCR Super Mix   10 μL

                        ddH₂O                    7 μL

                 cDNA模板（50 ng/μL）           2 μL

反应条件：96℃ 2 min；95 ℃ 15 s，60 ℃ 15 s，72 ℃ 45 s，40次循环，进行qRT-PCR检测，并使用iQ?5软件进行分析。

4.一种黄瓜受低硝态氮胁迫标记基因及其在黄瓜栽培生产中的应用

   以正常硝态氮肥（14 mM）栽培条件下生长的黄瓜品种为对照，以不同基因型的黄瓜品种或在不同环境条件下生长的同一黄瓜品种的叶片为待检测材料，提取总RNA，并反转录得到cDNA，以此为模板，以黄瓜低硝态氮胁迫标记基因特异序列片段为引物，以CsEF1α 为内参基因，进行qRT-PCR检测，并使用iQ?5软件进行分析，如果黄瓜低硝态氮胁迫标记基因锌指同源异型域转录因子CsZHD5的表达模式在待检测黄瓜品种中为上调表达，且表达倍数大于3，则表明该黄瓜品种的生长环境受到了低硝态氮肥的胁迫，暗示农民应该增施硝态氮肥，以维持黄瓜植株的正常生长和发育；证明黄瓜锌指同源异型域转录因子CsZHD5基因是一个可以广泛应用于鉴定黄瓜低硝态氮肥栽培环境的标记基因。