[发明专利]一种埃博拉病毒快速分型鉴别检测试剂盒

权利要求书

1.一种埃博拉病毒分型鉴别检测试剂盒，包括：1)RT-PCR反应液、引物探针混合液、RT-PCR反应酶系、DEPC H₂O，阴性质控品、阳性质控品和2)分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒，其中引物探针混合液由埃博拉病毒四种型特异性的正、反向引物，埃博拉病毒四种型特异性的探针组成，其特征在于： 

1)本迪布焦埃博拉病毒特异性的正向和反向引物的序列分别是5’-TTGGAAAGTAATGCGGTAAAATA-3’和5’-GCAGCCAATGTTCTCTTGATGT-3’，本迪布焦埃博拉病毒特异性探针的序列是5’-CTACTCCCTGCTGCCTCGAGTGGAAA-3’，探针的两端分别结合有荧光发生基团FAM和荧光淬灭基团BHQ1；该对引物探针可特异性地检测本迪布焦埃博拉病毒，对其他型别埃博拉病毒无交叉反应； 

2)扎伊尔埃博拉病毒特异性的正向和反向引物的序列分别是5’-GATGCCAACGAYGCTGTGAT-3’和5’-TGCAAGAGGATGGAGACGAA-3’，扎伊尔埃博拉病毒特异性探针的序列是5’-TCAGTGGCTCAAGCTCGTTTTTCAGGT-3’，探针的两端分别结合有荧光发生基团HEX和荧光淬灭基团BHQ1；该对引物探针可特异性地检测扎伊尔埃博拉病毒，对其他型别埃博拉病毒无交叉反应； 

3)苏丹埃博拉病毒特异性的正向和反向引物的序列分别是5’-TGGTGTTGTTGACCCGTATG-3’和5’-CGTCGTCCAAATTGAAGAGAT-3’，苏丹埃博拉病毒特异性探针的序列是5’-CCTGACTACGAGGATTCGGCTGAAG-3’，探针的两端分别结合有荧光发生基团Texas Red和荧光淬灭基团Eclipse；该对引物探针可特异性地检测苏丹埃博拉病毒，对其他型别埃博拉病毒无交叉反应； 

4)塔伊森林埃博拉病毒特异性的正向和反向引物的序列分别是5’-CAACAACAAACACAGTCTTACAGG-3’和5’-TTATCCCTGGCGTATTCTTGA-3’，塔伊森林埃博拉病毒特异性探针的序列是5’-CTCCACACAAAACAATGACAATCCTGC-3’，探针的两端分别结合有荧光发生基团Cy5和荧光淬灭基团Eclipse；该对引物探针可特异性地检测塔伊森林埃博拉病毒，对其他型别埃博拉病毒无交叉反应。 

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征还在于所用探针3‘端可采用TAMRA、BHQ1、BHQ2、Eclipse、Dabcy 1中任一荧光淬灭基团标记，所述2)中所用探针5‘端可采用VIC、HEX、YELLOW中任一荧光基团标记，所述3)中所用探针5‘端可采用ROX、Texas Red中任一荧光基团标记，所述4)中所用探针5‘端可采用CY5、CY5.5中任一荧光基团标记。 

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征还在于引物探针混合液中引物浓度均为0.2mmol/L，探针浓度均为0.1mmol/L。 

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征还在于RT-PCR反应液由pH值为8.0～8.8的 50mmol/L Tris-HCl、3～8mmol/L MgCl₂、150～350mmol/L KCl组成。 

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其中RT-PCR反应酶系由热启动Taq酶、逆转录酶、dNTPs组成，特征在于每人份RT-PCR反应酶系中热启动Taq酶的用量为5～10U；逆转录酶用量为1.5～5U；dNTPs为6～12mmol。 

6.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于PCR扩增的条件为：50℃15分钟，95℃15分钟；94℃15秒，58℃35秒，45个循环。 

7.根据权利要求1的试剂盒，还提供了阴性质控品和阳性质控品，其特征在于阴性质控品为健康人血浆，阳性质控品为含有埃博拉病毒四种型别的目的基因RNA。 

8.根据权利要求7的试剂盒，阳性质控品为基因合成方式制备的含四种型别埃博拉病毒目的全长的RNA。