[发明专利]一种二乙酰精胺的检测试剂盒及制备方法和应用

权利要求书

1.一种二乙酰精胺的检测试剂盒，包括试纸条，试纸条从加样端依次为玻璃纤维素膜、金垫、NC膜、吸水纸；其特征在于：金垫上包被有胶体金标记的二乙酰精胺(DiAcSpm)和肌酐(CRE)的单克隆抗体及羊抗兔抗体；NC膜上的检测区(T)有DiAcSpm和CRE的抗原、标准区(C)有羊抗兔或羊抗鼠抗体。

2.按权利要求1所述的二乙酰精胺的检测试剂盒，其特征在于：

所述DiAcSpm抗原为乙酰基精胺(AcSpm)同牛血清白蛋白(BSA)偶联所得；

所述DiAcSpm抗体由乙酰基精胺(AcSpm)同牛血清白蛋白(BSA)偶联再免疫小鼠，而获得DiAcSpm单克隆抗体；

所述CRE抗原为CRE同牛血清白蛋白(BSA)或牛甲状腺球蛋白(BTG)偶联所得；

所述CRE抗体为CRE同牛血清白蛋白(BSA)或牛甲状腺球蛋白(BTG)偶联再免疫鼠或羊，而获得CRE单克隆抗体。

3.按权利要求1或2所述的二乙酰精胺的检测试剂盒，其特征在于：所述金垫上包被有胶体金标记的二乙酰精胺(DiAcSpm)和肌酐(CRE)的单克隆抗体及羊抗兔抗体的制备采用铺金或喷金的方式获得。

4.按权利要求3所述的二乙酰精胺的检测试剂盒，其特征在于：所述铺金或喷金的方式，分别向经调整PH值的胶体金中加入DiAcSpm和CRE的单克隆抗体，以及兔抗体，静置5-15min后分别加入20％BSA进行封闭，再次静置5-15min,静置后分别离心收集沉淀，所得沉淀再分别用复溶液复溶，所得复溶后的溶液混匀后均匀铺在或喷在玻璃纤维素膜或聚酯纤维素膜上，真空冻干、真空抽干或烘干后即得到包被有胶体金标记的二乙酰精胺(DiAcSpm)和肌酐(CRE)的单克隆抗体及羊抗兔抗体的金垫。

5.按权利要求4所述的二乙酰精胺的检测试剂盒，其特征在于：所述铺金或喷金的方式，分别向经调整PH值的胶体金中加入1-25μg DiAcSpm单克隆抗体、1-25μg CRE的单克隆抗体，以及10-30μg兔抗体，静置5-15min后加入20％BSA进行封闭，再次静置5-15min,静置后以9000-12000的转数离心7-15min收集沉淀，分别对获得的DiAcSpm单克隆抗体、CRE的单克隆抗体和兔抗体沉淀中依次加入复溶液对沉淀进行复溶，再将所得复溶的溶液混合，混匀后均匀铺在或喷在玻璃纤维素膜或聚酯纤维素膜上，真空冻干、真空抽干或烘干后，即得到包被有胶体金标记的二乙酰精胺(DiAcSpm)和肌酐(CRE)的单克隆抗体及羊抗兔抗体的金垫；

其中，经调整PH值为的胶体金是每1ml胶体金，用2-10μL 0.2M K₂CO₃调整胶体金的PH值；

所述，铺金方式所得获得的DiAcSpm单克隆抗体、CRE的单克隆抗体和兔抗体沉淀中依次加入500-1000μL或30-50μL、500-1000μL复溶液对沉淀进行复溶；

喷金方式所得获得的DiAcSpm单克隆抗体、CRE的单克隆抗体和兔抗体沉淀中依次加入30-50μL、1-2ml或30-50μL复溶液对沉淀进行复溶。

6.按权利要求4或5所述的二乙酰精胺的检测试剂盒，其特征在于：所述复溶液按重量百分比计，0.3％-1％Tris、0-1％柠檬酸三钠、0-2％PVP40、0.1-0.5％TWEEN 20、0-0.5％Triton X-405、0-0.5％NP40、0-4％蔗糖、0.5-1.5％PEG 20000、0.1-1％BSA、0-1％Casein-Na、0-1％SDS，余量为水。

7.一种二乙酰精胺的检测试剂盒的制备方法，其特征在于：

1)采用胶体金分别标记DiAcSpm和CRE的单克隆抗体及兔抗体，分别获得复溶的溶液；

2)将上述获得的复溶的溶液混合，混匀后均匀铺在或喷在玻璃纤维素膜或聚酯纤维素膜上，真空冻干、真空抽干或烘干后待用，即得金垫；

3)将DiAcSpm和CRE的抗原溶液、羊抗兔溶液，分别固定在NC膜检测区的检测线上和标准区的标准线上，即得到包被好的NC膜；

4)将玻璃纤维素膜、上述获得的铺金或喷金的金垫、包被抗原的NC膜、吸水纸依次粘附在PVC板上，斩切、组装后即得检测试剂盒。