[发明专利]以顶芽为启动材料的牛角瓜种苗组培快速扩繁的方法

说明书

技术领域

 本发明属于植物无性繁殖的方法，尤其是苗木生产的植物组织培养方法。

背景技术

牛角瓜(Calotropis gigantean)系萝蘑科牛角瓜属多年生直立灌木，高可达3m，又名断肠草、羊浸树、五狗卧花心，叶倒卵状长圆形或椭圆状长圆形，聚伞花序伞形状，腋生或顶生。牛角瓜主要分布在我国的云南、四川、广西和广东等省区，耐贫瘠、耐干旱，能够适应干热河谷、盐碱地、沿海沙滩等热带和亚热带地区的生态脆弱环境，如在云南干热河谷地区瘠薄的石砾土中均能正常生长，并开花结果，是困难地段植被重建时的重要先锋树种。

牛角瓜果实中的纤维，经处理后可得到具有一定柔软度的纤维，可替代棉纤维而用于纺织生产，织成的面料既有丝绸的滑爽质感，又有类似棉织物的舒适感和透气性，是一种新型的天然、环保、卫生的纤维原料，其纺织技术已十分成熟，在纺织领域具有很好的应用前景。而牛角瓜茎纤维的纤维素含量比棉低，与棉相比，牛角瓜茎纤维木质素含量很高，是一种适合生产更高强度、更耐用的复合材料的原材料。此外，由于牛角瓜果实有毒，可杀虫和驱蚊；其根、茎、叶、花、果及各部位的乳白色汁液均可药用，具有抗菌、解毒、消炎等功效，可用于治疗肿瘤、哮喘、溃疡等疾病；还可提炼树胶原料、黄色染料，做绿肥等，是一种多用途的经济植物。

目前，牛角瓜已经有规模化人工种植，其种苗繁殖方式常采用种子进行有性繁殖，也可通过扦插进行繁殖。由于在产业化发展过程中，为了提高其适应性和单位面积纤维产量，只有选用优良单株或优良种源作为母本材料进行扩繁，而将优良单株作为母株进行无性扩繁，是最为有效的方式之一，从而使母本的优良性状得以遗传。采用常规的扦插无性繁殖，需建立专门的采穗圃来提供插穗，而采用组培的方法进行繁育，只需少量材料就能够快速高效地实现优良单株扩繁。李克烈以牛角瓜的叶片为材料进行了组培育苗，通过诱导出愈伤组织，再从愈伤组织进行诱导分化芽，最后移栽成苗，移栽成活率为85%（李克烈，罗联忠，陈伟，等.牛角瓜的组织培养[J].广西农业生物科学，2007，26(3):247-249）。但通过叶片诱导愈伤组织再分化出苗的方法，容易产生变异苗。这是因为叶片由栅栏组织、海绵组织、表皮组织等构成，其诱导的愈伤组织会存在异质性；此外，植物组培过程中，经过愈伤组织途径或多次继代培养后，易导致分裂素不正常，也增加变异植株发生频率。

发明内容

针对目前牛角瓜育苗成苗方式存在的不足，本发明的目的在于以牛角瓜优良单株的顶芽为启动材料，通过促腋芽发生型方式，进行快速扩繁，从而提供一种遗传性状稳定，繁殖系数高，生根快，根系发达，移栽易成活的牛角瓜种苗组培快繁方法。

    上述目的按以下的方法实现：

    （2）顶芽伸长培养：将采集的顶芽进行消毒处理，去除叶柄、切除顶芽基部和顶端的褐化部分，控制顶芽长度在2-3cm之间，切除顶端褐化部分时需保留芽尖，两端褐化部分切除后，接种于顶芽启动培养基上，在启动培养条件下培养1周，顶芽开始生长，20天后将伸长生长的顶芽进行下一步的增殖培养；

     所述的启动培养基为MS+6-BA0.1-0.3mg/L+NAA0.1mg/L+0.1g/L活性碳+30g/L白沙糖，pH值5.8-6.0；

     所述的启动培养条件的光强为1500-2000Lx，光照时间为12小时/天，温度为23±2℃；

    （3）促腋芽快速增殖培养：将伸长生长的顶芽去顶后切成带1-2个节间的茎段，去除茎段上的叶柄，横放在增殖培养基上进行培养，25天后进行继代转接，此后，重复本步骤，快速增殖，芽苗增殖后进行生根培养；

所述的增殖培养基为MS+6-BA0.5-1.0mg/L+KT0.2 mg/L +NAA0.1mg/L+30g/L白沙糖，pH值5.8-6.0；所述的培养条件与步骤（2）相同；

   （4）丛生芽生根培养：将小苗单株切下，保留2-4个叶片，置于生根培养基进行培养，20天后生根培养生根率达100%，根系呈辐射状，单株平均根系10条以上；

     所述的生根培养基为1/2MS+IBA0.1-0.3mg/L+0.1g/L活性碳+15g/L白沙糖，pH值5.8-6.0，所述的培养条件与步骤（2）相同；

   （5）组培苗移栽和定植。

进一步，所述的方法是步骤（1）中所选取的牛角瓜优良单株上生长健状、尚未木质化的枝条为嫩枝。

 进一步，所述的方法是步骤（3）所述的增殖培养的繁殖倍数为5倍以上。