[发明专利]一种1-羧烷基地西泮的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种1-羧烷基地西泮的制备方法，属于生物化工技术领域。

背景技术

地西伴（Diazepam）又名安定，为苯二氮卓类镇静安眠药，属于第二代安眠镇静药，化学名称为：1-甲基-5-苯基-7-氯-1,3-二氢-2H-1,4-苯并二氮卓-2-酮。但一些养殖企业为了提高饲料报酬，将其用作动物饲料添加剂，致动物嗜睡少动，生长快且有改变肉质的作用。也有用在动物屠宰、检疫前，或动物转移运输屠宰前，起镇静作用，以减轻动物紧张状态，降低动物伤害和死亡率。此类药物常见嗜睡，可见无力、头痛、晕眩、恶心、便秘，偶见皮疹、肝损害、骨髓抑制等不良反应。若随意在饲料中添加此类药物，蓄积的药物通过食物链进入人体，将造成巨大的危害。为此许多国家将此类药物列入禁用药物名单，明令禁止在动物饲料和饮水中使用。

目前，国内外有关地西伴的检测主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、薄层色谱法(TLC)、气-质联用法(GC-MS)、液-质联用法(LC-MS)等，虽检测准确，但设备昂贵，需专业人员，且样品前处理麻烦，耗时。免疫分析技术作为一种简单快速特异性强的检测方法，在现在的实际检测中应用越来越多。在研究免疫方法时，一个合适的半抗原是很重要的，从地西泮分子结构可以看出，没有可以直接利用的活性基团，不能直接与蛋白进行偶联合成免疫原。

本发明以去甲西泮为原料，在位点1上引入一个可直接进行偶联的活性基团羧基，很好的满足作为半抗原的条件，为应用于地西泮的免疫研究提供参考。

发明内容

本发明的目的在于提供一种地西泮衍生物1-羧烷基地西泮的合成方法。本发明采用去甲西泮作为原料，通过对位点1上的氢进行取代反应，引入一个含羧基的基团，所制得的化合物可以用在地西泮免疫分析方法的研究，为抗原的合成提供了一种可能的半抗原。

本发明的技术方案，一种1-羧烷基地西泮的制备方法，其合成路线流程图如下：

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（1）6-溴己酸甲酯的制备：将6-溴己酸溶于甲醇，浓度为1mmol/mL，再按6-溴己酸与氯化亚砜摩尔比1:1.5混合，50℃回流反应2-3h，45℃真空旋干溶剂甲醇，制得6-溴己酸甲酯；

（2）1-己酸甲酯地西泮的合成：将去甲西泮和18-冠醚-6按摩尔比1:1溶于无水四氢呋喃中，浓度为去甲西泮6.0-6.5 mmol/100mL无水四氢呋喃，冰浴冷却、搅拌下加入与去甲西泮等摩尔量的甲醇钠溶液室温搅拌1h，备用；

冰浴冷却下，向上述溶液中滴加入与去甲西泮等摩尔量的6-溴己酸甲酯，室温搅拌过夜，50℃真空旋转蒸发除去溶剂，粗品经柱层析纯化得酯化物1-己酸甲酯地西泮；

（3）1-羧烷基地西泮的合成：将酯化物1-己酸甲酯地西泮溶于四氢呋喃-纯水溶液（V/V = 3/1）中，1-己酸甲酯地西泮浓度为3-3.3mmol/10mL，室温搅拌反应12h，50℃旋蒸除去溶剂四氢呋喃，用0.5N盐酸调节pH至7-8，采用二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，38℃真空旋转蒸干，所得粗品经柱层析纯化，得产物1-羧烷基地西泮。

步骤（1）中6-溴己酸溶于甲醇后，必须要在冰浴搅拌的过程中，缓慢滴加氯化亚砜，待滴加完全后，再升温回流；

步骤（2）中去甲西泮和18-冠醚-6溶于四氢呋喃后，须在冰浴条件下加入甲醇钠和6-溴己酸甲酯；

步骤（3）中1-己酸甲酯地西泮溶解在四氢呋喃-纯水的混合溶液中，纯化是需用0.5N盐酸调节pH至7-8。

本发明的有益效果：本发明提供的合成步骤简单有效，经鉴定纯度很高，可以满足国内对地西泮免疫研究的需要。

附图说明

图1  1-羧烷基地西泮(d)核磁图

图2  1-羧烷基地西泮(d)液相色谱图

图3  1-羧烷基地西泮(d)质谱图。

具体实施方式

实施例1

（1）6-溴己酸甲酯（b）的制备：将1.95克6-溴己酸（10mmol）加入10mL甲醇中，冰浴搅拌下缓慢滴加氯化亚砜（15 mmol），然后升温至回流，50℃回保持回流2-3h。反应结束后，45℃真空旋转蒸发旋干，再加入甲醇旋干重复两次（10mL×2），制得物质6-溴己酸甲酯（b），备用。