[发明专利]一种龙脷叶悬浮细胞培养的快速繁殖方法

权利要求书

1. 一种龙脷叶悬浮细胞培养的快速繁殖方法，包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的诱变、悬浮细胞的培养，其主要步骤如下：

（1）取龙脷叶幼嫩的叶片，在超净工作台上进行消毒处理；

（2）取步骤（1）消毒处理过的叶片接入BEMB+6-BA0.1mg/L+2，4-D1mg/L培养基中进行愈伤组织诱导，附加7.5g/L，琼脂30g/L蔗糖，温度23℃，湿度75%；

（3）取步骤（2）诱导出来的愈伤组织，对其进行C⁺诱变，剂量为1×10¹³ions/cm²，能量为30-50keV；

（4）取步骤（3）诱变后的愈伤组织，接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培养基中进行愈伤组织增殖，附加7.5g/L，琼脂30g/L蔗糖，温度25℃，光照2500lx，湿度85%；

（5）取步骤（4）增殖后的愈伤组织接入BEMB+NAA2mg/L+KT0.2mg/L培养基中进行悬浮细胞培养。

2. 按照权利要求1所述的一种龙脷叶悬浮细胞培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（1）中所述龙脷叶无菌叶片的获得为，取龙脷叶幼嫩叶片，在洗衣粉中浸泡15min，流水冲洗15min，超净工作台上0.3%氯化汞处理13min，无菌水冲洗5遍。

3. 按照权利要求1所述的一种龙脷叶悬浮细胞培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（5）中悬浮细胞的培养方法为接种量60g/L，温度27℃，水平振荡培养，转速70r/min，培养周期30天。