[发明专利]一种卤醇脱卤酶及其在合成他汀类药物中间体中的应用

权利要求书

1.一种卤醇脱卤酶，其是由SEQ ID No：4所示氨基酸序列组成的蛋白质。

2.编码权利要求1所述的卤醇脱卤酶的分离的核酸。

3.根据权利要求2所述的核酸，其是由SEQ ID No：1所示核苷酸序列组成的。

4.包含权利要求2或3所述的核酸的重组表达载体。

5.根据权利要求4所述的重组表达载体，其选自质粒、噬菌体或非噬菌体病毒载体。

6.根据权利要求5所述的重组表达载体，其是pET系列质粒。

7.包含权利要求4-6任一项所述的重组表达载体的重组表达转化体，其是将权利要求4-6任一项所述的重组表达载体转化至大肠杆菌宿主细胞中制得。

8.根据权利要求7所述的重组表达转化体，其特征在于所述的大肠杆菌宿主细胞是E.coli BL21(DE3)。

9.一种重组卤醇脱卤酶的制备方法，包括如下步骤：培养权利要求7-8任一项所述的重组表达转化体以及从培养物中获得重组卤醇脱卤酶。

10.一种催化邻-卤醇化合物进行取代反应的催化剂，其选自权利要求7-8任一项所述的重组表达转化体的培养物或通过将所述培养物离心分离后得到的转化体细胞或者将所述的转化体细胞加工的制品。

11.权利要求10所述的催化剂，其特征在于所述的加工的制品是由所述转化体细胞得到的提取物、通过对所述提取物中的卤醇脱卤酶进行分离和/或纯化得到的分离产品、或通过固定化所述转化体细胞或所述提取物或所述提取物的分离产品而得到的固定化制品。

12.权利要求1所述的卤醇脱卤酶、权利要求9所述的方法制备的重组卤醇脱卤酶或权利要求10或11所述的催化剂在催化式II所示的邻-卤醇化合物与R₁M’进行取代反应生成式I所示的卤素被取代的化合物中的应用，

其中式II化合物选自：

其中式I化合物选自：

R₁M’为NaCN、KCN、NaN₃或KAcO。

13.根据权利要求12所述的应用，其中式II化合物选自：

其中式I化合物选自：

14.根据权利要求12-13任一项所述的应用，其中所述的取代反应在含有磷酸盐缓冲液的pH 7.0-9.0的甲醇水溶液中进行。

15.根据权利要求12-13任一项所述的应用，其中所述的邻-卤醇化合物在反应液中的浓度为1-800mmol/L，所述的卤醇脱卤酶浓度为0.1-50g/L，反应试剂R₁M’的浓度为1-1100mol/L，反应在振荡或搅拌条件下进行，反应温度为30-50℃。

16.根据权利要求12-13任一项所述的应用，其中所述的邻-卤醇化合物在反应液中的浓度为100mmol/L，所述的卤醇脱卤酶浓度为10g/L，反应试剂R₁M’的浓度为110mol/L，反应在振荡或搅拌条件下进行，反应温度为30-50℃。