[发明专利]监测Hg2＋污染的微生物全细胞发光报告传感器及其制备的试剂盒和应用

权利要求书

1.一种用于监测环境中Hg²⁺污染的大肠杆菌与假单胞菌穿梭重组质粒pUCp18-MP，其特征在于：是以pUCp18为骨架，在EcoRI、XhoI及XhoI、BamHI位点分别插入egfp片段、merR-Pt启动子片段而获得。

2.一种用于监测环境中Hg²⁺污染的高耐汞细菌BMB-Hg，是恶臭假单胞菌(Pseudomonas Putida)，它的保藏号是CCTCC NO：M 2014351。

3.一种用于监测环境中Hg²⁺污染的微生物全细胞发光报告传感器BMB-MP菌株，其特征在于，是以权利要求2所述的恶臭假单胞菌BMB-Hg为宿主菌，在宿主菌中含有如权利要求1所述的重组质粒pUCp18-MP。

4.权利要求3所述的BMB-MP菌株在监测环境中Hg²⁺污染中的用途。

5.一种用于监测环境中Hg²⁺污染的试剂盒，其特征在于，其组成为：包埋固定化的如权利要求3所述的BMB-MP菌株颗粒、检测缓冲液和全黑带盖96孔板；

所述缓冲液的配方是：1000mL去离子水中，NaH₂PO₃0.3g，Na₂HPO₃2.2g，NaCl 8.5g，微量元素液1mL，葡萄糖0.1g，NaNO₃0.1g，60％H₂O₂0.1mL，缓冲液pH值为7.2；其中微量元素液配比如下：五水硫酸铜：0.816g、碘化钾：0.11g、钼酸铵：0.272g、氯化锌：0.272g、硫酸亚铁：0.884g、氯化钴：0.68g、去离子水：1.36L。

6.一种用权利要求5所述的试剂盒检测Hg²⁺污染的方法，其特征在于：是通过在缓冲液体系中加入固定化的BMB-MP菌株颗粒，经Hg²⁺的诱导引起菌体细胞荧光蛋白表达，以荧光强度的变化来检测环境中Hg²⁺的污染。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤如下：取固定化BMB-MP颗粒8颗，分别加入两个黑色96孔板检测孔中，每孔4颗，分设为对照孔和测定孔；在测定孔中加入缓冲液稀释好的待测样品100μL，对照孔中加入空白缓冲液100μL；震荡摇匀，然后盖上黑色板盖置于20℃孵育12小时；孵育完毕后在多功能酶标仪检测槽中直接检测对照和测定孔的荧光强度，检测条件设置为：激发波长480nm，发射波长507nm；根据标准曲线即可算出样品中汞污染的浓度；计算公式如下：(Y_测定—Y_对照—0.0966)/0.0066＝X；其中Y为荧光强度，X为污染物浓度。