[发明专利]用N-酰基乙醇胺提高植物种子超低温保藏后存活率的方法及其应用

权利要求书

1.用N-酰基乙醇胺提高植物种子超低温保藏后存活率的方法，其特征在于取植物种子的胚轴，将N-酰基乙醇胺施加于植物种子胚轴，进行预处理及超低温保藏实验，并进行萌发力实验检测活力。

2.如权利要求1所述的用N-酰基乙醇胺提高种子超低温保藏后存活率的方法，其特征在于将植物种子胚轴剥出，在无菌条件下加入N-酰基乙醇胺，25℃暗处理3小时，之后用高温消毒过的硅胶进行干燥处理4小时，将胚轴放入超低温冻存管中，插入液氮中保存1周后，将冻存管从液氮中迅速取出放入已经预热的40℃的水浴锅中2分钟，之后将胚轴置于WPM和6-BA的恢复培养基中25℃暗萌发7天，然后再转移至光下进行萌发。

3.如权利要求1所述的用N-酰基乙醇胺提高种子超低温保藏后存活率的方法，其特征在于将植物种子胚轴剥出，在无菌条件下每10个胚轴加入1ml100μM的PLDα特异性抑制剂N-酰基乙醇胺，25℃暗处理3小时，之后使用高温消毒过的硅胶进行干燥处理4个小时，将每10个胚轴放入1ml超低温冻存管中，直接插入液氮中保存，经过1周液氮保存后，将冻存管从液氮中迅速取出放入已经预热的40℃的水浴锅中2分钟，之后将胚轴置于WPM和6-BA的恢复培养基中25℃暗萌发7天，之后再转移至光下进行萌发。

4.如权利要求1所述的用N-酰基乙醇胺提高种子超低温保藏后存活率的方法，其特征在于取中间型植物种子去皮后，用75％的酒精浸泡1分钟进行表面消毒，之后用清水洗净，在无菌操作条件下，将种子的胚轴取出，每10个胚轴为一个重复，每个处理5个重复，分别放入1ml水、100μMDMSO和100μM NAE的处理液中，置于25℃暗处理3小时；将胚轴取出，放在高温消毒过的硅胶上进行干燥4小时，将每10个胚轴放入1ml超低温冻存管中，快速放入液氮中进行保藏1周，经过1周液氮保存后，将冻存管从液氮中迅速取出放入已经预热的40℃的水浴锅中2分钟，之后将胚轴置于WPM和6-BA的恢复培养基中25℃暗萌发7天，之后再转移至光下进行萌发，经过NAE预处理后的种子胚轴存活率和再生率显著增高。

5.如权利要求1所述的用N-酰基乙醇胺提高种子超低温保藏后存活率的方法，其特征在于取取植物中间型种子去皮后，用75％的酒精浸泡1分钟进行表面消毒，之后用清水洗净，在无菌操作条件下，将种子的胚轴取出，每10个胚轴为一个重复，每个处理5个重复，分别放入1ml水、100μM DMSO和100μM NAE的处理液中，置于25℃暗处理3小时；将胚轴取出，放在高温消毒过的硅胶上进行干燥4小时，将每10个胚轴放入1ml超低温冻存管中，快速放入液氮中进行保藏1周后，将冻存管从液氮中迅速取出放入已经预热的40℃的水浴锅中2分钟，之后进行脂类提取检测分析；将每10个胚轴加入3ml预热的异丙醇中，在75℃水浴锅中固定15min，室温冷却后，加入氯仿和甲醇的提取液中提取3天，合并上清，用氮气吹干，在105℃烘箱内烘干种子，并称量得到干重，所提出的脂进行脂类检测分析。

6.N-酰基乙醇胺在植物种子超低温保藏中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于是将植物种子胚轴剥出，在无菌条件下每10个胚轴加入1ml100μM的PLDα特异性抑制剂N-酰基乙醇胺，25℃暗处理3小时，之后使用高温消毒过的硅胶进行干燥处理4个小时，将每10个胚轴放入1ml超低温冻存管中，直接插入液氮中保存，经过1周液氮保存后，将冻存管从液氮中迅速取出放入已经预热的40℃的水浴锅中2分钟，之后将胚轴置于WPM和6-BA的恢复培养基中25℃暗萌发7天，之后再转移至光下进行萌发。

8.如权利要求6所述的应用，其特征在于N-酰基乙醇胺通过降低PLDα活性，改变膜脂组成，提高胚轴在超低温保藏后的存活率。